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提供商: 上海研謹(jǐn)生物
服務(wù)名稱(chēng): 基于生物質(zhì)譜的蛋白鑒定

、定量

、翻譯后修飾分析
服務(wù)：            2-5周
規(guī)格:           實(shí)驗(yàn)服務(wù)
價(jià)格：          500元
收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
歡迎咨詢(xún)?cè)斦?div id="jpandex" class="focus-wrap mb20 cf">，我們?huì)根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。
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基于生物質(zhì)譜的蛋白鑒定

、定量、翻譯后修飾分析

實(shí)驗(yàn)原理
蛋白質(zhì)經(jīng)過(guò)蛋白酶的酶切消化后成肽段混合物

，在質(zhì)譜儀中肽段混合物電離形成帶電離子,質(zhì)譜分析器的電場(chǎng)

、磁場(chǎng)將具有特定質(zhì)量與電荷比值(即質(zhì)荷比, M/Z) 的肽段離子分離開(kāi)來(lái),經(jīng)過(guò)檢測(cè)器收集分離的離子,確定每個(gè)離子的MZ值

。經(jīng)過(guò)質(zhì)量分析器可分析出每個(gè)肽段的MIZ.得到蛋白質(zhì)所有肽段的M/Z圖譜，即蛋白質(zhì)的--級(jí)質(zhì)譜峰圖

。離子選擇裝置自動(dòng)選取強(qiáng)度較大肽段離子進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜分析，輸出選取肽段的二級(jí)質(zhì)譜峰圖

，通過(guò)和理論.上蛋白質(zhì)經(jīng)過(guò)胰蛋白酶消化后產(chǎn)生的--級(jí)質(zhì)譜峰圖和二級(jí)質(zhì)譜峰圖進(jìn)行比對(duì)而鑒定蛋白質(zhì)。根據(jù)離子源的不同

，目前用于蛋白分析的主流質(zhì)譜技術(shù)主要有電噴霧離子化質(zhì)譜(ESHMS) 和基質(zhì)輔助激光解析電離質(zhì)譜(ML ADHMS)。質(zhì)量分析器主要有四極桿分析器(QE).離子阱分析器(Orbitrap)

、飛行時(shí)間分析器 (MLADI-TOF)

。
生物質(zhì)譜在蛋白分析方面的應(yīng)用
1.蛋白鑒定:由于各種蛋白質(zhì)的氨基酸序列(--級(jí)結(jié)構(gòu))不同

，蛋白質(zhì)被酶解后產(chǎn)生的肽段序列也各異

，肽混合物質(zhì)量數(shù)亦具有特征性，稱(chēng)為肽質(zhì)量指紋譜(peptide mass fingerprint, PMF)

，可用于蛋白質(zhì)的鑒定。
2.蛋白定量:基于穩(wěn)定同位素標(biāo)記法

，如SIL AC. QconCAT. iTRAQ等;基于質(zhì)譜歸--化的非標(biāo)定量法，如蛋白豐度指數(shù)法PAI

、多肽匹配數(shù)、譜圖計(jì)數(shù)

、碎片離子峰強(qiáng)度(iBAQ) , SWATH等

。
3.蛋白翻譯后修飾:根據(jù)特定修飾基團(tuán)的圖譜特點(diǎn)進(jìn)行翻譯后修飾的鑒定和定位

，包括磷酸化、糖基化

、巰基和二硫鍵定
位

、乙?div id="jpandex" class="focus-wrap mb20 cf">；⒎核鼗?div id="jpandex" class="focus-wrap mb20 cf">。
實(shí)驗(yàn)步驟
①組織或細(xì)胞蛋白提取;
②蛋白酶消化

，將蛋白樣品制備成多肽;
③多肽抽提和質(zhì)譜儀分析，產(chǎn)生肽段質(zhì)荷比和肽離子質(zhì)量;
④搜庫(kù)

、打分

、輸出排序;
⑤搜庫(kù)后分析

，蛋白鑒定

、定量或翻譯后修飾分析

。
實(shí)驗(yàn)完成周期及交付標(biāo)準(zhǔn)
1.實(shí)驗(yàn)完成周期10~30天,
2.交付標(biāo)準(zhǔn):
①主要儀器、試劑和實(shí)驗(yàn)方法:
②包含protein ID. gene symbol. spectrum count. u-peptide. z-score.

、 coverage等信息的蛋白鑒定列表;
③所有肽段信息表;
④質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)(raw data)。

、定量

、翻譯后修飾分析.png" style="width: 554px; height: 424px;">

需確認(rèn)的信息
1.樣品:①如果樣品為蛋白質(zhì)溶液

，蛋白質(zhì)總量≥300mg ;
②.如果是組織樣品，樣品總量≥0.1g;如果是細(xì)胞樣品

，細(xì)胞數(shù)量≥107個(gè);
③、如果是體液樣品

，血清≥200ml,腦脊液≥200ml,尿液≥1ml, 淚液≥1ml;
2.樣品采集過(guò)程中使用到塑料制品時(shí)，盡量使用無(wú)色產(chǎn)品

，以減少塑料制品中雜質(zhì)對(duì)質(zhì)譜檢測(cè)的影響;
3.確認(rèn)樣品所屬種屬、分析需求

。
文獻(xiàn)參考
[1]Liu Q, et al. In-depth proteomic characterization of endogenous nuclear receptors in mouse liver. Mol Cell Proteomics.2013;12(2):473-84.
[2]Ruprecht B, et al. MALDI-TOF and nESI Orbitrap MS/MS identify orthogonal parts of the phosphoproteome.
Proteomics.2016;16(10);:1447-56.
[3]Kobayashi D, et al. Identification of a specific translational machinery via TCTP-EF1A2 interaction regulating NF1-associated tumor growth by afinity purification and data-independent mass spectrometry acquisition (AP-DIASWATH).Mol Cell Proteomics.2018 Oct 31. PubMed PMID: 30381327.

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，QE）實(shí)驗(yàn)服務(wù)"> 液質(zhì)聯(lián)用（LC-MS/MS
，QE）實(shí)驗(yàn)服務(wù)
酪蛋白酶譜MMP（3/10）檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
、定量
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、定量
、翻譯后修飾分析
非標(biāo)定量（Label-free）實(shí)驗(yàn)
多肽合成與修飾技術(shù)服務(wù)
蛋白質(zhì)純化實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
蛋白雙向2D-WB電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)
SILAC代謝標(biāo)記定量實(shí)驗(yàn)服務(wù)
平行反應(yīng)監(jiān)測(cè)技術(shù)(PRM) 實(shí)驗(yàn)服務(wù)
MALDI-TOF/TOF質(zhì)譜鑒定電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)
同位素標(biāo)記定量

，是在傳統(tǒng)雙向電泳的基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)的新型蛋白質(zhì)組學(xué)定量技術(shù)"> DIGE一雙向熒光差異凝膠電泳(Two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis ,2D-DIGE)<div id=

DIGE一雙向熒光差異凝膠電泳(Two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis ,2D-DIGE)<div id=

，是在傳統(tǒng)雙向電泳的基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)的新型蛋白質(zhì)組學(xué)定量技術(shù)" src="http://m.zshz.cc/usr/uploads/0/202201/DIGE%E6%8A%80%E6%9C%AF%E5%AE%9E%E9%AA%8C%E6%9C%8D%E5%8A%A1%E5%B0%8F%E5%9B%BE.jpg" /> DIGE一雙向熒光差異凝膠電泳(Two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis ,2D-DIGE)，是在傳統(tǒng)雙向電泳的基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)的新型蛋白質(zhì)組學(xué)定量技術(shù)

、翻譯后修飾分析" oldvalue="基于生物質(zhì)譜的蛋白鑒定

、定量

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