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，加入顯色后，可以在不同時間反復(fù)用酶標儀讀板使檢測時間更加靈活，而且不影響細胞進行后續(xù)實驗。
 
Q :在做細胞的加藥實驗時，藥物對CCK-8測定是否有影響?如何解決?
 
A: 1)注意如果藥物具有還原性(如維生素C)，會和CCK-8發(fā)生顯色反應(yīng)增加吸光度。
2)藥物中的金屬對CCK-8顯色有影響:當終濃度為1mM的氯化亞鉛、氧化鐵、硫酸銅會抑制5%,15%, 90%的顯色反應(yīng)使靈敏度降級。如果終濃度是10mM的話，將會100%抑制。解決辦法:首先要確認藥物是否有吸收,在含有藥物的
培養(yǎng)基中加入CCK-8,測定450nm的吸光度如果它的吸光度比不含藥物的培養(yǎng)基(加CCK-8)的吸光度高，則證明藥物有影響，可在加CCK-8之前更換培養(yǎng)基，去掉藥物的影響。
3) 由于培養(yǎng)基中可能含有氧化還原反應(yīng)的物質(zhì)，在正式實驗之前建議使用一個孔作-一 下檢測，有必要先確認培養(yǎng)基和CCK-8是否反應(yīng)。-般正常的0D值應(yīng)該在0.4以下。
 
Q: CCK-8如何設(shè)定空白對照?
A :在不含細胞的培養(yǎng)基中加入CCK-8.培養(yǎng)-定的時間，測定450nm的吸光度即為空白對照。 在做加藥實驗(細胞毒性實驗)時，還應(yīng)考慮藥物的吸收可在不含細胞.加入藥物的培養(yǎng)基中加入CCK-8,培養(yǎng)-定的時間，測定450nm的吸光度作為空白對照。
 
 
Q: CCK-8對于不同的細胞，靈敏度是否-樣?
A:不一樣,懸浮細胞較貼壁細胞難染色。對于貼壁細胞,一般加入CCK 8培養(yǎng)1-4小時吸光度已經(jīng)很高，但對于懸浮細胞則可能吸光度較低，可以通過延長CCK-8的加入時間或增加細胞數(shù)量來解決。
 
Q :可否采用CCK-8法進行腫瘤細胞的基質(zhì)黏附實驗?
A :可以，以層粘連蛋白(Ln)包被96孔板通過計算不同時間點孔板中貼壁細胞的數(shù)量反映細胞的黏附性。細胞的黏附性越強，則單位時間內(nèi)貼于鋪有L n板底的細胞數(shù)量越多去除尚末貼壁的細胞后,應(yīng)用CCK-8等方法計量細胞數(shù)量便可間接反映不同細胞或不同處理的細胞黏附能力的差異。
 
Q :可否采用CCK-8法進行藥物的IC50檢測?
A :可以，將細胞培養(yǎng)后按照不同濃度的藥物處理定時間后進行CCK-8檢測，根據(jù)吸光度繪制曲線，計算該藥物抑制細胞數(shù)量一半時的濃度(IC50)