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服務(wù)名稱:    石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡
提供商:      上海研研謹(jǐn)生物
規(guī)格:        石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡
價(jià)格： 10-15元
TUNEL凋亡顯色法
TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的原理是當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)

，DNA內(nèi)切酶被激活

，核小體間的基因組DNA被切斷，暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)
加上帶有生物素(Biotin) 標(biāo)記的dUTP即Bitin-dUTP.,隨后于辣根過氧化物酶 (HRP) 標(biāo)記的streptavidin結(jié)合

，在HRP的催化下通過DAB顯色來顯示凋亡細(xì)胞,從而可以通過普通光學(xué)顯微鏡檢測(cè)到細(xì)胞凋亡。

實(shí)驗(yàn)意義
1. TUNEL法是一種分子生物學(xué) 與形態(tài)學(xué)相結(jié)合的研究方法

，可對(duì)完整的單個(gè)凋亡細(xì)胞或者凋亡小體進(jìn)行原位染色

，可以準(zhǔn)確反映細(xì)胞凋亡最典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征。
2.可用于石蠟切片冰凍切片培養(yǎng)的細(xì)胞等進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測(cè)

，靈敏度遠(yuǎn)比一般的組織化學(xué)和生物化學(xué)方法要高

。
3.操作簡(jiǎn)便快捷，在細(xì)胞凋亡的研究中被廣泛采用

。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.石蠟切片TUNEL顯色法:
①石蠟切片常規(guī)脫蠟至水

，脫蠟劑二甲苯，至水劑乙醇;
②PBS漂洗3*5 min; .
③加入蛋白酶K工作液37°C反應(yīng)15-30 min, PBS漂洗3x5 min;
④4%多聚甲醛(pH7 .4的PBS)室溫固定15-30 min, PBS漂洗3x5 min;
⑤浸入封閉液(3%H202)室溫封閉10 min, PBS漂洗3x5 min;
⑥加入適量TdT酶反應(yīng)液

，暗濕盒中37°C反應(yīng)1 h,用SSC室溫15 min終止反應(yīng)后,PBS漂洗3x5 min; .
⑦浸入0.3% H202封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性

，室溫孵育3-5 min, PBS漂洗3x5 min;
⑧滴加Streptavidin-HRP工作液，37*C反應(yīng)30-60 min, PBS漂洗3x5 min;
⑨滴加DAB顯色液后用去離子水漂洗數(shù)次;
10.選擇是否用DAPI復(fù)染細(xì)胞核;
脫水

、透明

、中性樹膠封片后進(jìn)行觀察。

2.冰凍切片TUNEL顯色法:
①新鮮組織經(jīng)處理后

，立即在恒冷冰凍切片機(jī)內(nèi)切片

，厚度為5~6 um;
②防脫玻片，貼片

，室溫陰干約12 h;
③4%多聚甲醛(pH7 4的PBS)室溫固定10 min, PBS漂洗3x5 min;
④浸入封閉液(3%H202)室溫封閉10 min, PBS漂洗3x5 min;
⑤浸入邇透液(0.1% Triton X-100溶于PBS中)

，室溫通透30 S-2 min;
⑥加入適量TdT酶反應(yīng)液，暗濕盒中37°C反應(yīng)1 h,用SSC室溫15 min終止反應(yīng)后

，PBS漂洗3x5 min; .
⑦浸入0.3% H2O2封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性

，室溫孵育3-5 min, PBS漂洗3x5 min;
⑧滴加Streptavidin-HRP工作液，379C反應(yīng)30-60 min, PBS漂洗3x5 min;
⑨滴加DAB顯色液后用去離子水漂洗數(shù)次:
@選擇是否用DAPI復(fù)染細(xì)胞核;
脫水

、透明

、中性樹膠封片后進(jìn)行觀察。

實(shí)驗(yàn)完成周期及交付標(biāo)準(zhǔn)
1.實(shí)驗(yàn)周期: 1-2周
2.交付標(biāo)準(zhǔn):蠟塊

、切片

、染色圖片.實(shí)驗(yàn)報(bào)告(實(shí)驗(yàn)步驟、試劑

、耗材等)

需確認(rèn)的信息
1.樣本的種屬.
2.樣本的類型(固定的組織or蠟塊or切片)
3.是否提供試劑盒
4.拍照要求

收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)服務(wù)周期提供結(jié)果:
歡迎咨詢?cè)斦?div id="jfovm50" class="index-wrap">，我們?huì)根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議

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