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提供商:         上海研謹生物
服務名稱:       平行反應監(jiān)測技術(PRM) 實驗服務
服務：            1-2周
規(guī)格:           實驗服務
價格：          500元
收費標準/服務周期/提供結果:
歡迎咨詢詳談

，我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細的服務協(xié)議

。
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平行反應監(jiān)測技術(PRM) :
PRM是一種基于高分辨

、高精度質譜的離子監(jiān)視技術

，能夠對目標蛋白質、目標肽段(如發(fā)生翻譯后修飾的肽段)進行選擇性檢測

，從而實現(xiàn)對目標蛋白質/肽段進行絕對定量

。PRM技術基于Q-Orbitrap為代表的高分辨、高精度質譜平臺

，首先
利用四級桿質量分析器的選擇能力

，用Q1選擇目標肽段的母離子,隨后在Collision cell中對母離子進行碎裂，最后利用Orbitrap分析器在二級質譜中檢測所選擇的母離子窗口內的所有碎片信息

。這樣即可對復雜樣本中的目標蛋白質/肽段進行準確地特異性分析

。
實驗意義:
PRM技術是針對無抗體蛋白的驗證新技術

，用于label free, iTRAQ, TMT, SILAC等相對定量蛋白質組數(shù)據(jù)的驗證，或對復雜樣本中的目標蛋白質進行靶向定量分析

。
實驗步驟:
用PRM進行蛋白質組數(shù)據(jù)驗證的一般步驟為:

結果展示

實驗完成周期及交付標準:
1.實驗周期: --般PRM時間為: 5-10天
2.交付標準:
組學驗證:
①主要儀器

、試劑和實驗方法。
②PRM目標離子信息:肽段序列和定量子離子

。
③方法學重復性評價:三次技術重復的色譜峰面積相對標準偏差(RSD) (預實驗結果)

。
④實驗結果:二級圖譜，XIC圖譜,原始峰面積強度值

，矯正后的相對表達量

，兩組樣本間的相對比值，ttest p值

。
相對/絕對定量:
①主要儀器

、試劑和實驗方法。
②PRM目標離子信息:肽段序列和定量子離子

。
③方法學評價:相對定量的重復性評價-測試樣本的三次技術重復的色譜峰面積相對標準偏差(RSD) (預實驗結果) ;
絕對定量的方法學評價-標準品XIC圖譜

，LOD， LOQ,線性范圍

， 6個稀釋梯度得到的標準曲線及線性公式(每個稀釋度有3次技術重復)

。
④實驗結果:
相對定量:二級圖譜，XIC圖譜,原始峰面積強度值

，矯正后的相對表達量

，兩組樣本間的相對比值，ttest p值

。
絕對定量:二級圖譜

，XIC圖譜,原始峰面積強度值，根據(jù)標準曲線計算得到的蛋白質濃度值

，兩組樣本間的相對比值

，ttest p值。
需確認的信息:
1.樣品:
①如果樣品為蛋白質溶液

，蛋白質總量≥300mg;
②如果是組織樣品

，樣品總量≥0.1g;如果是細胞樣品，細胞數(shù)量≥107個;
③如果是體液樣品

，血清≥200ml

，腦脊液≥200ml, 尿液≥1ml,淚液≥1ml。
2.樣品采集過程中使用到塑料制品時

，盡量使用無色進口產(chǎn)品

，以減少塑料制品中雜質對質譜檢測的影響。
文獻參考
[1] Navin Rauniyar. Parallel Reaction Monitoring: A Targeted Experiment Performed Using High Resolution and HighMass Accuracy Mass Spectrometry. IntJ Mol Sci. 2015 Dec; 16(12): 28566- -28581.

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、定量、翻譯后修飾分析

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同位素標記定量

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，是在傳統(tǒng)雙向電泳的基礎上發(fā)展而來的新型蛋白質組學定量技術" src="http://m.zshz.cc/usr/uploads/0/202201/DIGE%E6%8A%80%E6%9C%AF%E5%AE%9E%E9%AA%8C%E6%9C%8D%E5%8A%A1%E5%B0%8F%E5%9B%BE.jpg" /> DIGE一雙向熒光差異凝膠電泳(Two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis ,2D-DIGE)，是在傳統(tǒng)雙向電泳的基礎上發(fā)展而來的新型蛋白質組學定量技術

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