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提供商:         上海研謹生物
服務名稱:     實時熒光定量PCR實時熒光定量PCR
規(guī)格:           實驗服務
價格：          200元

實時熒光定量PCR實驗服務

提供快捷高效的實時熒光定量PCR(Real TIme PCR,RT PCR)服務

，所謂實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團

，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程

，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。是一個常用的mRNA水平的基因表達定量技術

。

服務內(nèi)容
細胞組織的基因差異表達檢測

，經(jīng)過不同處理樣本之間特定基因的表達差異(如藥物處理、物理處理

、化學處理等)

，特定基因在不同時段的表達差異以及cDNA芯片或差顯結果的確證。
組織/細胞樣品中基因拷貝數(shù)的確定

，DNA或RNA的相對和絕對定量分析

。包括病原微生物或病毒含量的檢測，轉基因動植物轉基因拷貝數(shù)的檢測

，RNAI基因失活率的檢測等

。基因分型

，基因突變及多態(tài)性方面的研究

。

技術原理
Real-time PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團

，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程

，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。利用熒光信號的變化實時檢測PCR擴增反應中每一個循環(huán)擴增產(chǎn)物量的變化

，通過Ct值和標準曲線的分析對起始模板進行定量分析

。實時熒光定量PCR技術具有特異性強，有效解決了PCR污染問題

、自動化程度高等特點

，做到PCR每循環(huán)一次就收集一個數(shù)據(jù)，建立實時擴增曲線

，準確地確定Ct值

，從而根據(jù)Ct值確定起始DNA拷貝數(shù)。做到了真正意義上的DNA定量

。

技術流程
一

、RNA的提取
二、DNase I消化樣品RNA中的DNA
三、RNA瓊脂糖凝膠電泳
四

、RNA反轉錄為cDNA
Real-Time PCR弓物設計的要求
①Tm=55~65 °C
②GC=30~80%
③PCR擴增產(chǎn)物長度:引物的產(chǎn)物大小不要太大

，一般在80~300 bp之間都可。
④引物的退火溫度要高

，-般要在60 °C以上

。

五、cDNA與引物質量檢測
選擇特異性好

。擴增效率高的引物作為實時熒光使用引物

。

六利用相對定量的方法分析目的基因表達量的情況:
常用的看家基因有B-actin, GAPDH, 188 rRNA

七、定量PCR檢測

八擴增曲線和溶解曲線
溶解曲線全部為單峰表明為特異性擴增

，熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段

，熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。

收費標準/服務周期/提供結果:
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