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提供商:        上海研謹(jǐn)生物
服務(wù)名稱: 單克隆抗體制備服務(wù)
規(guī)格:          實驗服務(wù)
價格：        8000元
收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
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單克隆抗體(MAb)是針專- -的抗原決定簇產(chǎn)生的抗體，單克隆技術(shù)又名雜交瘤技術(shù)起源于1975年

，由G. KOhler和Milstein創(chuàng)立

。主要原理是利用產(chǎn)生抗體的B細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞雜交融合成雜交瘤細(xì)胞，生產(chǎn)抗體

。

雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗是針對體的主要步驟包括:
(1 )抗原制備

，
(2)免疫動物,
(3)免疫脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的制備,
(4)細(xì)胞融合;
(5)雜交瘤細(xì)胞的選擇培養(yǎng)，
(6)雜交瘤細(xì)胞的篩選;
(7)雜交瘤細(xì)胞的克隆化;
(8)單克隆抗體的檢定;
(9)分泌單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞系的建立:
(10)單克隆抗體的大量制備

。

單克隆抗體的制備過程:
1

、免疫動物免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細(xì)胞的過程

。一般選用6- 8周齡雌性Balb/c小鼠

，按照預(yù)先制定的免疫方案進(jìn)行免疫注射?div id="jfovm50" class="index-wrap">？乖ㄟ^血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫器官

，刺激相應(yīng)B淋巴細(xì)胞克隆，使其活化

、增殖

，并分化成為致敏B淋巴細(xì)胞。
2

、細(xì)胞融合采用眼球摘除放血法處死小鼠

，無菌操作取出脾臟，在平皿內(nèi)擠壓研磨

，制備脾細(xì)胞懸液。將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞按一定比例混合, 并加入促融合劑聚乙二醇

。在聚乙二醇作下

，各種淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合，形成雜交瘤細(xì)胞

。
3

、選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細(xì)胞，一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。在HAT培養(yǎng)基中

，未融合的骨髓瘤細(xì)胞因缺乏次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶

，不能利用補(bǔ)救途徑合成DNA而死亡。未融合的淋巴細(xì)胞雖具有次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶

，但其本身不能在體外長期存活也逐漸死亡

。只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從脾細(xì)胞獲得了次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，并具有骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖的特性

，因此能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖

。
4、雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化在HAT培養(yǎng)基中生長的雜交瘤細(xì)胞

，只有少數(shù)是分泌預(yù)定特異性單克隆抗體的細(xì)胞

，因此，必須進(jìn)行篩選和克隆化

。通常采用有限稀釋法進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)

。采用靈敏、快速

、特異的免疫學(xué)方法

，篩選出能產(chǎn)生所需單克隆抗體的陽性雜交瘤細(xì)胞，并進(jìn)行克隆擴(kuò)增

。
經(jīng)過全面鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類型

、亞類、特異性

、親和力

、識別抗原的表位及其分子后，及時進(jìn)行凍存

。
5

、單克隆抗體的大量制備單克隆抗體的大量制備重要采用動物體內(nèi)誘生法和體
外培養(yǎng)法。
(1)體內(nèi)誘生法取Balb/c小鼠

，首先腹腔注射0. 5ml液體石臘或降植烷進(jìn)行預(yù)處理

。1-2周后，腹腔內(nèi)接種雜交瘤細(xì)胞

。雜交瘤細(xì)胞在小鼠腹腔內(nèi)增殖

，并產(chǎn)生和分泌單克隆抗體。約1-2周

，可見小鼠腹部膨大

。用注射器抽取腹水，即可獲得大量單克隆抗體

。
(2)體外培養(yǎng)法將雜交瘤細(xì)胞置于培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)

。在培養(yǎng)過程中，雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生并分泌單克隆抗體，收集培養(yǎng)上清液

，離心去除細(xì)胞及其碎片

，即可獲得所需要的單克隆抗體。但這種方法產(chǎn)生的抗體量有限

。近年來,各種新型培養(yǎng)技術(shù)和裝置不斷出現(xiàn)

，大大提高了抗體的生產(chǎn)量。雜交瘤細(xì)胞融合后

，要進(jìn)行篩選后才能使用

。雜交瘤細(xì)胞分為兩次:一、篩選出雜交瘤細(xì)胞;二

、在初選的雜交瘤細(xì)胞中篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞

，這兩次篩選的方法和原理各不相同。

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