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提供商:         上海研謹生物
服務(wù)名稱:     斑點雜交實驗服務(wù)
規(guī)格:           實驗服務(wù)
價格：          2000元

斑點雜交實驗服務(wù)

實驗技術(shù)簡介:斑點雜交(Dotblot) 是將被檢標本點到膜上

，烘烤固定

。這種方法耗時短

，可做半定量分析

。- 張膜上可同時檢測多個樣品，為使點樣準確方便

，市售有多種多管吸印儀(Manifold) , 如MinifoldI和II. Smart Botter(Wealtec).Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri-Dot,它們有許多孔

，樣品加到孔中，在負壓下就會流到膜上呈斑點狀或狹縫狀

。反復(fù)沖洗進樣孔

，取出膜烤干或紫外線照射以固定標本，這時的膜就可以進行雜交

。

實驗技術(shù)原理:
斑點雜交是指將待測的DNA變性后點加在硝酸纖維素膜(或尼龍膜、NC膜)上, 用已標記的探針進行雜交

，洗膜(除去未接合的探針)

，放射自顯影，判斷是否有雜交及其雜交強度

，主要用于基因缺失或拷貝數(shù)改變的檢測

。

實驗操作流程:
1. DNA斑點雜交
①先將膜在水中浸濕

，再放到15*SSC中

。
②將DNA樣品溶于水或TE，煮沸5min,冰中速冷

。
③用鉛筆在濾膜上標好位置將DNA點樣于膜上

，每個樣品-般點5ul(2~10μg DNA)

。
④將膜烘干

，密封保存?zhèn)溆谩?br> 2、RNA斑點雜交
與上法類似

、

，每個樣品至多加10μg總RNA (經(jīng)酚/氨0仿或異硫青酸胍提取純化)。方法是將RNA溶于5μl DEPC水

，加5μI甲醛/SSC緩沖液(10*SSC中含6.15moI/L甲醛) ，使RNA變性

，然后取5-8μI點樣于處理好的濾膜上

，烘干。
3

、完整細胞斑點雜交
應(yīng)用類似檢測細菌菌落的方法

，可以對細胞培養(yǎng)物的特異序列進行快速檢測，將整個細胞點到膜上

，經(jīng)NaOH處理

，使DNA暴露、變性和固定

，再按常規(guī)方法進行雜交與檢測

。有人曾用此法從105個培養(yǎng)細胞中檢測到至少5pg的Epstein-Barr病毒DNA

。完整細胞斑點印跡法可以用于篩選大量標本

，因為它使細胞直接在膜上溶解，所以DNA含量甚至比常用的提取法還高

，又不影響與32P標記的探針雜交

，但它不適用于非放射性標記探針，因為DNA純度不夠

，會產(chǎn)生高本底。

實驗注意事項:
客戶提供:
TotalRNA (DNA) ≥20ug,濃度> 1ug/ul, A260/A280>1.8;提供標記后的探針

，需同時告知標記后探針的濃度及活性

，待檢測目的基因的Genbank序列號。

交付標準:
1

、圖片
2.完整項目報告(材料

、試劑

、儀器

、方法、數(shù)據(jù)分析

、實驗結(jié)果)
其他:
1.點樣量不要太大

，否則雜交后，X光片上點太大

，互相影響。
點樣前尼龍膜無需預(yù)處理

，點樣后自然晾干后

，分別在變性液和中和液中進行變性和中和。

收費標準/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
歡迎咨詢詳談

，我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細的服務(wù)協(xié)議

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