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提供商:             上海研謹生物
服務(wù)名稱: 石蠟冰凍切片TUNEL凋亡熒光
規(guī)格:               實驗服務(wù)
周期：             1-2周
價格：             15元

收費標準/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
歡迎咨詢詳談，我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細的服務(wù)協(xié)議。
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石蠟冰凍切片TUNEL凋亡熒光

TUNEL凋亡熒光實驗原理
dUTP缺口末端標記(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling

，TUNEL) 法檢測細胞凋亡的原理是當細胞發(fā)生凋亡時,DNA內(nèi)切酶被激活，核小體間的基因組DNA被切斷

，暴露的3-0H可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TerminalDeoxynucleotidyl Transferase, TdT)加上帶有熒光素FITC標記的dUTP,從而可以通過熒光顯微鏡進行檢測。

TUNEL凋亡熒光實驗意義
1.TUNEL法是一種分子生物學(xué)與形態(tài)學(xué)相結(jié)合的研究方法

，可對完整的單個凋亡細胞或者凋亡小體進行原位染色

，可以準確反映細胞凋亡最典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征。
2.可用于石蠟切片

、冰凍切片

、培養(yǎng)的細胞等進行細胞凋亡檢測，靈敏度遠比一般的組織化學(xué)和生物化學(xué)方法要高

。
3.操作簡便快捷

，在細胞凋亡的研究中被廣泛采用。

TUNEL凋亡熒光實驗步驟:
1.石蠟切片TUNEL顯色法:
①石蠟切片常規(guī)脫蠟至水

，脫蠟劑= =甲苯

，至水劑乙醇;
②PBS漂洗3*5 min; .
③加入蛋白酶K工作液379C反應(yīng)15-30 min, PBS漂洗3x5 min;
④4%多聚甲醛(pH7 4的PBS)室溫固定15-30 min, PBS漂洗3x5 min;
⑤浸入封閉液(3%H202)室溫封閉10 min, PBS漂洗3x5 min;
⑥參考使用試劑盒的說明書配制適量的TUNEL檢測液，其中含有TdT酶

、熒光標記液

、TUNEL檢測液;
⑦樣品上加入適量TUNEL檢測液，37°C避光孵育60 min, PBS漂洗3x5 min;
⑧選擇是否用DAPI復(fù)染細胞核;
⑨使用抗熒光淬滅封片液封片后在熒光顯微鏡下進行觀察

。

2.冰凍切片TUNEL顯色法:
①新鮮組織經(jīng)處理后

，立即在恒冷冰凍切片機內(nèi)切片，厚度為5~6 um;
②防脫玻片

，貼片

，室溫陰干約12h;③4%多聚甲醛(pH7 .4的PBS)室溫固定10 min,
PBS漂洗3x5 min;
④浸入封閉液(3%H20O2) 室溫封閉10 min, PBS漂洗3x5 min;
⑤浸入通透液(0.1%Triton X-100溶于PBS中)，室溫通透30 S-2 min;
⑥參考使用試劑盒的說明書配制適量的TUNEL檢測液

，其中含有TdT酶

、熒光標記液、TUNEL檢測液;
⑦樣品上加入適量TUNEL檢測液

，37°C避光孵育60 min, PBS漂洗3x5 min;
⑧選擇是否用DAPI復(fù)染細胞核:
⑨使用抗熒光淬滅封片液封片后在熒光顯微鏡下進行觀察

。

結(jié)果展示

實驗完成周期及交付標準
1.實驗周期: 1-2周
2.交付標準:蠟塊、切片

、染色圖片.實驗報告(實驗步驟

、試劑、耗材等)

需確認的信息
1.樣本的種屬
2.樣本的類型(固定的組織or蠟塊or切片)
3.是否提供試劑盒
4.拍照要求

從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域

、生物醫(yī)學(xué)實驗外包及論文潤色服務(wù)

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