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提供商:         上海研謹(jǐn)生物
服務(wù)名稱:       凋亡因子Caspase-389實(shí)驗(yàn)
規(guī)格:           實(shí)驗(yàn)服務(wù)
價(jià)格：          500元
周期：          10天左右
收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
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凋亡因子Caspase-389檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

Caspase3
Caspase是- -個(gè)在細(xì)胞凋亡過(guò)程中起重要作用的蛋白酶家族

。Caspase3也稱CPP32, 是細(xì)胞凋亡過(guò)程中的一個(gè)關(guān)鍵酶，可以剪切procaspase2.6. 7和9

，并可以直接特異性剪切許多caspase底物

，包括PARP (poly(ADP-ribose) polymerase), ICAD (Inhibitor of caspase-activated Deoxyri- bonuclease), gelsolin和fodrin等

。這些由caspase 3介導(dǎo)的蛋白剪切是細(xì)胞凋亡分子機(jī)制的重要組成部分

。caspase 3在細(xì)胞核凋亡過(guò)程中也起到了關(guān)鍵作用，包括染色質(zhì)固
縮

，DNA片段化等

。同時(shí)caspase 3對(duì)細(xì)胞起泡(Cell blebbing)也起到關(guān)鍵作用

。
檢測(cè)原理基于casepase 3可以催化底物AC-DEVD-pNA產(chǎn)生黃色的pNA(-itroaniline),從而可以通過(guò)測(cè)定吸光度來(lái)檢測(cè)caspase 3的活性。pNA在405nm附近有強(qiáng)吸收

。參照黃色產(chǎn)物pNA制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線

，可以作為定量caspase 3酶活性的標(biāo)準(zhǔn)品

。

Caspase-8
Caspase 8通常以酶原的形式存在

，在細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中被激活，Caspase 8被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中上游的caspase,在Fas-receptor和TNFR-1介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過(guò)程中caspase 8被激活,形成一個(gè)由p18和p10組成的二聚體

，進(jìn)一步激活下游的caspase 4, caspase 6。caspase 9和caspase 10

。本方法基于Caspase 8可以催化底物AC-IETD-pNA產(chǎn)生黃色的pNA (-nitraniline),從而可以通過(guò)測(cè)定吸光度來(lái)檢測(cè)Caspase 8的活性

。pNA在405nm附近有強(qiáng)吸收。檢測(cè)樣本的405nm OD值參照pNA制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線

，可以計(jì)算樣品的Caspase 8酶活性

。

Caspase-9
Caspase 9也稱ICE-LAP6或Mch6,是細(xì)胞凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中上游的caspase

。線粒體釋放細(xì)胞色素c以后

，caspase 9可以和細(xì)胞色素c以及Apaf1形成復(fù)合物，同時(shí)被激活

。激活的caspase 9可以激活細(xì)胞凋的最關(guān)鍵酶caspase 3,從而促進(jìn)后續(xù)的細(xì)胞凋亡信號(hào)。Caspase 9的激活可以通過(guò)磷酸化進(jìn)行調(diào)控

。

本方法基于Caspase 9可以催化底物Ac- LEHD -pNA產(chǎn)“生黃色的pNA (p-nitroaniline),從而可以通過(guò)測(cè)定吸光度來(lái)檢測(cè)

Caspase 9的活性

。pNA在405nm附近有強(qiáng)吸收

。檢測(cè)樣本的405nm OD值參照pNA制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線

，可以計(jì)算樣品的Caspase 9酶活性。
Caspase1
Caspase2
Caspase4
Caspase6

凋亡因子Caspase 3/8/9檢測(cè)樣本準(zhǔn)備:
1)細(xì)胞樣品:取1x107個(gè)細(xì)胞(約1個(gè)T25的培養(yǎng)瓶細(xì)胞量) , 600g 4°C離心5分鐘收集細(xì)胞

，小心吸除上清，PBS洗滌一次

。吸取上清后

，每管細(xì)胞樣品加入100u|裂解液重懸沉淀,冰浴裂解15分鐘。4°C 16,000g離心10-15分鐘

，把上清轉(zhuǎn)移到冰浴預(yù)冷的離心管中。立即測(cè)定caspase 3的酶活性或-70°C保存樣品

。同時(shí)可以取少量樣品用Bradford法測(cè)定蛋白濃度

，盡量使蛋白濃度達(dá)到1-3mg/ml.
2)組織樣品:約每10mg組織加入100ul裂解液

，在冰浴上用玻璃勻漿器勻漿

。然后把勻漿液轉(zhuǎn)移到1 .5ml)離心管中，冰浴再裂解5分鐘

。4°C 16,000g離心10-15分鐘，把上清轉(zhuǎn)移到冰浴預(yù)冷的離心管中

。立即測(cè)定caspase 3的酶活性或-70°C保存
樣品

。同時(shí)可以取少量樣品用Bradford法測(cè)定蛋白濃度

，盡量使蛋白濃度達(dá)到1-3mg/ml.
Caspase-3活性檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線

實(shí)驗(yàn)周期: 7-10個(gè)工作日內(nèi)完成

，重復(fù)檢測(cè)優(yōu)惠

。
客戶注意事項(xiàng)
1.抗體:事先咨詢上海研謹(jǐn)生物

，明確抗體種屬以及是否有該抗體可使用

。如無(wú)可由雙方協(xié)商而定，客戶自己購(gòu)買(mǎi)提供或我公司代購(gòu);
2.標(biāo)本收集與保存:
①組織樣品:新鮮組織放入液氮或-70度保存,組織不少于100mg (約綠豆大小) ;
②培養(yǎng)細(xì)胞:通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)取不少于000000個(gè)細(xì)胞于EP管

，加入0.5ml生理鹽水或蛋白保護(hù)劑，混勻后保存于冰箱(-70°C

，避免反復(fù)凍融) ;
③血液細(xì)胞標(biāo)本:以抗凝管保存血樣或以淋巴細(xì)胞分離液分離細(xì)胞后加入0.5ml生理鹽水或蛋白保護(hù)劑

，保存(-70°C可長(zhǎng)期保存

，避免反復(fù)凍融)
④血清或細(xì)胞培養(yǎng)液標(biāo)本:離心去掉雜質(zhì)后取上清入EP管

，保存(以上4°C可保存15-20天，-70°C可長(zhǎng)期保存

，避免反復(fù)凍融)
3、樣本運(yùn)輸:可選以下任何的一種方式寄送標(biāo)本
①組織樣本

、細(xì)胞樣本以干冰運(yùn)輸或加入蛋白保護(hù)劑后加冰袋運(yùn)輸;
②細(xì)胞樣本也可以直接快件寄送培養(yǎng)瓶(密封保證不污染

，培養(yǎng)液不漏出,細(xì)胞不要長(zhǎng)得太滿，50%左右,灌滿培養(yǎng)液) ;
③血清或上清液直接加冰袋寄送(密封保證液體不漏出

，視路途遠(yuǎn)近2-3天可到達(dá))。
從2011年開(kāi)始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域

、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤(rùn)色服務(wù)

，協(xié)助客戶各類(lèi)實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色

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