Calu-3 人肺腺癌細(xì)胞傳代
、復(fù)蘇操作技巧

Calu-3 人肺腺癌細(xì)胞
Human lung Adenocarcinoma Cells ,Calu3
貨號(hào)：YJ-h035（STR鑒定）
價(jià)格： 1800.0
規(guī)格： 1*10⁶
細(xì)胞介紹
該患者為25歲白人男性

，已經(jīng)用環(huán)磷酰胺

、爭(zhēng)光霉素

、阿霉素進(jìn)行過(guò)治療。
細(xì)胞特性
1）來(lái)源：肺
2）形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

，貼壁生長(zhǎng)
3）含量：>1x10⁶細(xì)胞數(shù)
4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途：僅供科研使用

。
運(yùn)輸和保存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇

，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈

、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染

，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系

。
（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作

。
細(xì)胞接收后的處理
1）收到細(xì)胞后

，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h

，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們

。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×

，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存

，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h

，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況

，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下

，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收

，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL

，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上

，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理

。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收

。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞
，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代
。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備
1）準(zhǔn)備MEM（推薦YJ-0012）培養(yǎng)基
；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
；雙抗
，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣

，95%

；二氧化碳，5%

。溫度：37攝氏度

，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清

，10%DMSO

，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍

，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻

。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液

，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞

。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度

。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%

，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清

，用不含鈣

、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL

，T75瓶2-3mL）

，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間）

，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況

，若細(xì)胞大部分變圓并脫落

，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化

。
3.輕輕打勻后吸出

，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液

，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻

。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力

，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行

。
3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
下面T25瓶為例

；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中

，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度

。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個(gè)活細(xì)胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min

，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞

，按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中

，標(biāo)注好名稱、代數(shù)

、日期等信息

。
3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜

，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存

。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
注意事項(xiàng)
1.收到細(xì)胞后

，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈

、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染

，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系

。
2.收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)

。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況

，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況

，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)

，100*，200*各一張）

，觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況

。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)

。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?div id="jfovm50" class="index-wrap">，故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)

，故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天

。
4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性

，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)

，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄

。

從2011年開(kāi)始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤(rùn)色服務(wù)

，協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色十多年

，是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究

，歡迎您與我們聯(lián)系

。

實(shí)驗(yàn)代做：

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