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、緩沖液

小鼠外周血血小板分離液試劑盒

產(chǎn)品編號(hào)：PLA2011M

別名	小鼠外周血血小板分離液試劑盒
英文名

MSDS 大包裝詢價(jià)

中文名稱：小鼠外周血血小板分離液試劑盒
中文別名：小鼠外周血血小板分離液試劑盒

產(chǎn)品類別：血小板的分離

產(chǎn)品編號(hào)：PLA2011M

產(chǎn)品名稱：小鼠外周血血小板分離液試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：200ml/KIT

產(chǎn)品價(jià)格：￥500.00元

本品用于分離小鼠外周血血小板

“XXXX”動(dòng)物外周血血小板分離液實(shí)驗(yàn)方法

技術(shù)文檔編號(hào)：TBD0049SOP

【產(chǎn)品規(guī)格】

200ml/Kit

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：

	名稱	產(chǎn)品編號(hào)	規(guī)格

A	XXXX 動(dòng)物外周血血小板分離液		200ml

B	樣本稀釋液（贈(zèng)品）	2010C1119	200ml

C	清洗液（贈(zèng)品）	2010X1118	200ml

D	說(shuō)明書		1 份

【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】

適用儀器：最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)

【檢驗(yàn)方法】

全過(guò)程樣本

、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行

。

方法一：

在 15ml 離心管中，首先取抗凝血加于分離液之液面上（抗凝血與分離液最佳比例 1：2）
， 250-300g
，離心 15min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液樣本量越多
，離心力越大
，離心時(shí)間越長(zhǎng)，具體離心條件需客戶自行摸索
，以達(dá)到最佳分離效果）
。

離心后，此時(shí)離心管中由上至下分為四層
。第一層為血小板血漿層
。第二層為環(huán)狀乳白色細(xì)胞層。第三層為透明分離液層
。第四層為紅細(xì)胞層
。

用吸管小心吸取第一層血小板血漿層到另一 15ml 離心管中，往所得離心管中加入同體積樣本稀釋液（產(chǎn)品編號(hào)：2010C1119）
，混勻血小板（如需獲得的富集血小板血漿則不需加入稀釋液
，直接取血漿層即得）。

500g
，離心 20min
，離心后棄上清
。

向含有血小板沉淀的離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118）混勻，離心450g
，15min
，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸目的細(xì)胞。

方法二（需獲得血小板富集血漿的客戶請(qǐng)勿選擇此方法）：

1. 在 15ml 離心管中

，先加入 4ml 分離液

，再將分離液與樣本稀釋液 8：2 混合的液體 1ml

小心疊加于分離液之液面上形成梯度界面。

將抗凝血液樣本 2-3ml 小心加于分離液之液面上
，400g
，離心 20min。

離心后
，環(huán)狀血小板層存在于血漿層中
，取血小板層或血漿層（血小板層不明顯時(shí)）于另一 15ml 離心管中。

后續(xù)試驗(yàn)同方法一中的步驟 5
。

【注意事項(xiàng)】

全過(guò)程樣本
、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果
，最好在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)
，血液存放時(shí)間越長(zhǎng)，細(xì)胞分離效果越差
。血液放置超過(guò) 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的
。

本實(shí)驗(yàn)最好不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無(wú)靜電
、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品
，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會(huì)變成毛面
，影響細(xì)胞分離效果
。

吸取過(guò)多的血小板血漿層下層溶液會(huì)導(dǎo)致交界處單個(gè)核細(xì)胞混雜。

分離液用量大于血液樣本時(shí)
，分離效果更佳
。

如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過(guò)低，請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助
。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

常溫保存

，有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌

，需無(wú)菌條件操作

。無(wú)菌條件下操作，啟

封后置常溫保存。如 4℃保存

，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶

，影響分離效果

。

【參考值（參考范圍）】

本實(shí)驗(yàn)血小板提取率大于 80%

。

下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例，用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考

。

			紅細(xì)胞		白細(xì)胞		血小板

				（4.0-10.0）×10⁹
	含量（個(gè)/L）		（4.0-5.5）×10¹²	中性粒細(xì)胞	淋巴細(xì)胞	單核細(xì)胞	（1.0-3.0）×10¹¹
				50%-70%	20%-40%	3%-8%

【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】
1.		所獲得血小板的酸提取技術(shù) 。
2.		所獲得目的細(xì)胞的鑒定方法
		A.流式細(xì)胞技術(shù)

B.免疫組化技術(shù)

C.原位雜交技術(shù)

D.PCR 技術(shù)

【可能存在的問題及解決方法】

1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：

出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因	建議解決方案

離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層	轉(zhuǎn)速過(guò)小或離心時(shí)間過(guò)短	適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)
離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)

離心后白環(huán)層彌散	細(xì)胞密度過(guò)大	調(diào)整細(xì)胞密度

離心后白環(huán)層太淺或看不見	細(xì)胞密度過(guò)小
離心后白環(huán)層太淺或看不見	細(xì)胞密度過(guò)小

本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心
，其密度與溫度
、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整
。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)
，恒定離心時(shí)間，對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整
。

本分離液依照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)
，全部使用藥用級(jí)原料，性能指標(biāo)與國(guó)產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同
，可能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況
，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。

注：在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)

，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)

，直至達(dá)到最佳分離效果，

離心力最小不得小于 400g

，最大不得大于 1200g

。離心時(shí)間以 20-30min為準(zhǔn)。

技術(shù)支持：庫(kù)價(jià)化學(xué)(KuuJia)

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