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中文名稱(chēng)：馬腫瘤組織淋巴

、單核巨噬、粒細(xì)胞分離液試劑盒
中文別名：馬腫瘤組織淋巴

、單核巨噬

、粒細(xì)胞分離液試劑盒

產(chǎn)品類(lèi)別：腫瘤細(xì)胞的分離

產(chǎn)品編號(hào)：LPZHY2014H

產(chǎn)品名稱(chēng)：馬腫瘤組織淋巴、單核巨噬

、粒細(xì)胞分離液試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：3X200ml/Kit

產(chǎn)品價(jià)格：￥1200.00元

本品用于分離馬腫瘤組織淋巴

、單核巨噬

、粒細(xì)胞

“XXXX”動(dòng)物腫瘤組織淋巴細(xì)胞

、單核巨噬、粒細(xì)胞

分離液實(shí)驗(yàn)方法

技術(shù)文檔編號(hào)：TBD0052SOP

【產(chǎn)品規(guī)格】

3×200ml/Kit

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶(hù)使用

，試劑內(nèi)容如下：

	名稱(chēng)	產(chǎn)品編號(hào)	規(guī)格

A	分離液 1		200ml

B	分離液 2		200ml

C	分離液 3		200ml

D	試劑 F（贈(zèng)品）	F2013TBD	200ml

E	樣本稀釋液（贈(zèng)品）	2010C1119	200ml
F	清洗液（贈(zèng)品）	2010X1118	200ml
G	說(shuō)明書(shū)		1 份

【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】

適用儀器：最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)

【檢驗(yàn)方法】

全過(guò)程樣本

、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。

首先制備組織單細(xì)胞懸液
，制備方法詳見(jiàn)“組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)”
。取一支適當(dāng)?shù)碾x心管，依次小心加入分離液 1
、分離液 2
、分離液 3（體積比為 3:2:1，體積總量與組織單細(xì)胞懸液體積相等）
，制成梯度界面
，各液面分層一定要清晰。（如組織單細(xì)胞懸液樣本量為 6ml
，則加入分離液 1：3ml
、分離液 2：2ml、分離液 3：1ml
。）

用吸管小心吸取組織懸液樣本加于分離液液面上
，400-500g，離心 20-30min（注：根據(jù)組織懸液樣本量確定離心條件
，樣本量越多
，離心力越大，離心時(shí)間越長(zhǎng)
，最大離心力可達(dá) 1200g
，具體離心條件需客戶(hù)自行摸索
，以達(dá)到最佳分離效果）。
離心后
，此時(shí)離心管中將出現(xiàn)兩層環(huán)狀乳白色細(xì)胞層
。

用吸管吸取兩層環(huán)狀目的細(xì)胞層（如有紅細(xì)胞混雜則需用紅細(xì)胞裂解液（需另購(gòu)）裂解

紅細(xì)胞，具體操作說(shuō)明詳見(jiàn)“紅細(xì)胞裂解液使用說(shuō)明”）到 15ml 離心管中

，往所得離心

管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118）

，混勻細(xì)胞。

250g
，離心 10min
。

棄上清。

用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118）重懸所得細(xì)胞
。

250g
，離心 10min。

重復(fù) 6
、7
、8，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞
。

【注意事項(xiàng)】

全過(guò)程樣本
、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果
，最好在取樣 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)
，樣品存放時(shí)間越長(zhǎng)，細(xì)胞分離效果越差
。樣品放置超過(guò) 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的
。

本實(shí)驗(yàn)最好不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無(wú)靜電
、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品
，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會(huì)變成毛面
，影響細(xì)胞分離效果
。

如所實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過(guò)低，請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助
。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

常溫保存

，有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌

，需無(wú)菌條件操作

。無(wú)菌條件下操作，啟

封后置常溫保存

。

【參考值（參考范圍）】

本實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤組織淋巴細(xì)胞

、單核巨噬

、粒細(xì)胞提取率大于 80%。

下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例

，用戶(hù)可適當(dāng)進(jìn)行參考

。

	紅細(xì)胞		白細(xì)胞		血小板

		（4.0-10.0）×10⁹
含量（個(gè)/L）	（4.0-5.5）×10¹²	中性粒細(xì)胞	淋巴細(xì)胞	單核細(xì)胞	（1.0-3.0）×10¹¹
		50%-70%	20%-40%	3%-8%

【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】

組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)。

所獲得腫瘤組織淋巴細(xì)胞
、單核巨噬
、粒細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。

所獲得腫瘤組織淋巴細(xì)胞
、單核巨噬
、粒細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。

所獲得腫瘤組織淋巴細(xì)胞
、單核巨噬
、粒細(xì)胞的鑒定方法

A.流式細(xì)胞技術(shù)

B.免疫組化技術(shù)

C.原位雜交技術(shù)

D.PCR 技術(shù)

【可能存在的問(wèn)題及解決方法】

1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問(wèn)題及解決方案如下表所示：

出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因	建議解決方案

離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層	轉(zhuǎn)速過(guò)小或離心時(shí)間過(guò)短	適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)
離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)

離心后白環(huán)層彌散	細(xì)胞密度過(guò)大	調(diào)整細(xì)胞密度

離心后白環(huán)層太淺或看不見(jiàn)	細(xì)胞密度過(guò)小
離心后白環(huán)層太淺或看不見(jiàn)	細(xì)胞密度過(guò)小

本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心
，其密度與溫度
、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶(hù)可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整
。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)
，恒定離心時(shí)間
，對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整
。

本分離液依照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，全部使用藥用級(jí)原料
，性能指標(biāo)與國(guó)產(chǎn)同類(lèi)產(chǎn)品略有不同
，可能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速
。

注：在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)

，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達(dá)到最佳分離效果

，

離心力最小不得小于 400g

，最大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min 為準(zhǔn)

。

技術(shù)支持：庫(kù)價(jià)化學(xué)(KuuJia)

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別名	馬腫瘤組織淋巴、單核巨噬、粒細(xì)胞分離液試劑盒
英文名