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產(chǎn)品類別：組織上皮細胞的分離
 
產(chǎn)品編號：EPH2012RK
 
產(chǎn)品名稱：兔組織上皮細胞分離液試劑盒
 
產(chǎn)品規(guī)格：2X200ml/Kit
 
產(chǎn)品價格：￥1000.00元
 
本品用于分離兔組織上皮細胞












“XXXX”動物組織上皮細胞分離液實驗方法
 
技術(shù)文檔編號：TBD0046SOP
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
2×200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
 

	名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格
A	分離液 1		200ml
B	分離液 2		200ml
C	樣本稀釋液（贈品）	2010C1119	200ml
D	清洗液（贈品）	2010X1118	200ml
E	F 液（贈品）	F2013TBD	200ml
F	說明書		1 份

 
【實驗前準備】
 
適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。
 

• 首先制備臟器組織單細胞懸液，制備方法詳見“組織單細胞懸液制備技術(shù)（文檔編號：

 
TBD0004SOP）”。
 

• 取一支離心管
  ，依次小心加入分離液 1、分離液 2（體積比為 3:1
  ，試劑總量與細胞懸液體積比為 2：1
  。如細胞懸液為 2ml，則先后加入分離液 1：3ml
  、分離液 2：1ml
  。試劑總量最少不低于 4ml。）
  ，制成梯度界面
  ，各液面分層一定要清晰。

 

• 用吸管小心吸取細胞懸液加于分離液液面上
  ，500g
  ，離心 25min（注：根據(jù)樣本量確定離心條件，血液樣本量越多

  ，離心力越大

  ，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索

  ，以達到最佳分離效果）

  。

 

• 離心后
  ，此時離心管中由上至下分為六層。第一層為稀釋液層
  。第二層為環(huán)狀乳白色上皮細胞層（第一層白環(huán)及上層 50%分離液 2）
  。第三層為環(huán)狀乳白色單個核細胞層（下層50%分離液 2 及第二層白環(huán)）。第四層為透明分離液 1 液層
  。第五層為粒細胞層
  。第六層為紅細胞層。

• 用吸管小心吸取第二層到另一 15ml 離心管中
  ，往所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）
  ，混勻細胞。

 

• 250g
  ，離心 10min
  。

 

• 棄上清。

 

• 用吸管以 5-10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細胞
  。

 

• 250g
  ，離心 10min。

 

• 重復 7
  、8
  、9，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應液體重懸細胞
  。

 
分離圖例：
 
 

【差異貼壁法純化細胞】
 
（1）用上皮細胞無血清培養(yǎng)基（產(chǎn)品編號：TBD20180013）或上皮細胞完全培養(yǎng)基（產(chǎn)
 
品編號：TBD20180053）以 1.5-3×10⁶ 個/ml 的密度重懸細胞，將細胞鋪于一次性細胞
 
板或細胞瓶中，放于 37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中進行貼壁培養(yǎng)。
 
（2）2-4 小時內(nèi)貼壁的為巨噬細胞前體（俗稱為單核細胞）。
 
（3）10-24 小時內(nèi)貼壁的單個核細胞為內(nèi)皮、內(nèi)皮祖細胞、干細胞。
 
（4）不貼壁的為淋巴細胞。
 
注：
 

• 無血清培養(yǎng)基中不含任何動物成分
  ，為得到更佳培養(yǎng)效果可添加 10%自體血漿或2-8% 經(jīng)篩選的胎牛血清

  。

 

• 完全培養(yǎng)基中含 2-20%胎牛血清（血清具體含量由所培養(yǎng)的目的細胞而定）。

 

• 由于每種細胞的貼壁時間存在差異可將所得細胞分開已達簡單的純化目的
  ，此法成

本相對較低