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產(chǎn)品類別：組織上皮細(xì)胞的分離
 
產(chǎn)品編號(hào)：EP2012CMP
 
產(chǎn)品名稱：駱駝組織上皮細(xì)胞分離液試劑盒
 
產(chǎn)品規(guī)格：2X200ml/Kit
 
產(chǎn)品價(jià)格：￥1500.00元
 
本品用于分離駱駝組織上皮細(xì)胞







“XXXX”動(dòng)物組織上皮細(xì)胞分離液實(shí)驗(yàn)方法
 
技術(shù)文檔編號(hào)：TBD0046SOP
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
2×200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
 

	名稱	產(chǎn)品編號(hào)	規(guī)格
A	分離液 1		200ml
B	分離液 2		200ml
C	樣本稀釋液（贈(zèng)品）	2010C1119	200ml
D	清洗液（贈(zèng)品）	2010X1118	200ml
E	F 液（贈(zèng)品）	F2013TBD	200ml
F	說(shuō)明書		1 份

 
【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
 
適用儀器：最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
 
【檢驗(yàn)方法】
 
全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
 

• 首先制備臟器組織單細(xì)胞懸液
  ，制備方法詳見(jiàn)“組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)（文檔編號(hào)：

 
TBD0004SOP）”。
 

• 取一支離心管
  ，依次小心加入分離液 1
  、分離液 2（體積比為 3:1，試劑總量與細(xì)胞懸液體積比為 2：1
  。如細(xì)胞懸液為 2ml

  ，則先后加入分離液 1：3ml

  、分離液 2：1ml

  。試劑總量最少不低于 4ml。）

  ，制成梯度界面

  ，各液面分層一定要清晰。

 

• 用吸管小心吸取細(xì)胞懸液加于分離液液面上
  ，500g

  ，離心 25min（注：根據(jù)樣本量確定離心條件，血液樣本量越多

  ，離心力越大

  ，離心時(shí)間越長(zhǎng)，具體離心條件需客戶自行摸索

  ，以達(dá)到最佳分離效果）

  。

 

• 離心后，此時(shí)離心管中由上至下分為六層
  。第一層為稀釋液層
  。第二層為環(huán)狀乳白色上皮細(xì)胞層（第一層白環(huán)及上層 50%分離液 2）。第三層為環(huán)狀乳白色單個(gè)核細(xì)胞層（下層50%分離液 2 及第二層白環(huán)）
  。第四層為透明分離液 1 液層
  。第五層為粒細(xì)胞層。第六層為紅細(xì)胞層
  。

• 用吸管小心吸取第二層到另一 15ml 離心管中
  ，往所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118），混勻細(xì)胞
  。

 

• 250g
  ，離心 10min。

 

• 棄上清
  。

 

• 用吸管以 5-10ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118）重懸所得細(xì)胞
  。

 

• 250g，離心 10min
  。

 

• 重復(fù) 7
  、8
  、9，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞
  。

 
分離圖例：
 
 

【差異貼壁法純化細(xì)胞】
 
（1）用上皮細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基（產(chǎn)品編號(hào)：TBD20180013）或上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基（產(chǎn)
 
品編號(hào)：TBD20180053）以 1.5-3×10⁶ 個(gè)/ml 的密度重懸細(xì)胞，將細(xì)胞鋪于一次性細(xì)胞
 
板或細(xì)胞瓶中，放于 37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。
 
（2）2-4 小時(shí)內(nèi)貼壁的為巨噬細(xì)胞前體（俗稱為單核細(xì)胞）。
 
（3）10-24 小時(shí)內(nèi)貼壁的單個(gè)核細(xì)胞為內(nèi)皮、內(nèi)皮祖細(xì)胞、干細(xì)胞。
 
（4）不貼壁的為淋巴細(xì)胞。
 
注：
 

• 無(wú)血清培養(yǎng)基中不含任何動(dòng)物成分
  ，為得到更佳培養(yǎng)效果可添加 10%自體血漿或2-8% 經(jīng)篩選的胎牛血清
  。

 

• 完全培養(yǎng)基中含 2-20%胎牛血清（血清具體含量由所培養(yǎng)的目的細(xì)胞而定）。

 

• 由于每種細(xì)胞的貼壁時(shí)間存在差異可將所得細(xì)胞分開(kāi)已達(dá)簡(jiǎn)單的純化目的
  ，此法成

本相對(duì)較低
B.免疫組化技術(shù)
 
C.原位雜交技術(shù)
 
D.PCR 技術(shù)
 
 
【可能存在的問(wèn)題及解決方法】
 
1. 由于血液粘度