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10. 重復(fù) 7、8、9，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。
 
分離圖例
 

【差異貼壁法純化細(xì)胞】
 
（1）用巨核細(xì)胞無血清培養(yǎng)基（產(chǎn)品編號：MEGTBD2015）或巨核細(xì)胞完全培養(yǎng)基（產(chǎn)
 
品編號：HMEGTBD2015）以 1.5-3×10⁶ 個/ml 的密度重懸細(xì)胞，將細(xì)胞鋪于一次性細(xì)
 
胞板或細(xì)胞瓶中，放于 37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。
 
（2）2-4 小時內(nèi)貼壁的為巨噬細(xì)胞前體（俗稱為單核細(xì)胞）。
 
（3）10-24 小時內(nèi)貼壁的單個核細(xì)胞為內(nèi)皮、內(nèi)皮祖細(xì)胞、干細(xì)胞。
 
（4）不貼壁的為淋巴細(xì)胞。
 
注：
 

• 無血清培養(yǎng)基中不含任何動物成分
  ，為得到更佳培養(yǎng)效果可添加 10%自體血漿或2-8% 經(jīng)篩選的胎牛血清

  。
• 完全培養(yǎng)基中含 2-20%胎牛血清（血清具體含量由所培養(yǎng)的目的細(xì)胞而定）
  。

 

• 由于每種細(xì)胞的貼壁時間存在差異可將所得細(xì)胞分開已達(dá)簡單的純化目的
  ，此法成本相對較低

  。如需獲得高純度目的細(xì)胞則需在使用分離液后選用免疫磁珠陽性或陰

 
性分選。
 
【注意事項】
 
1. 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得最佳的實驗結(jié)果，最

好在取樣 2h 內(nèi)進(jìn)行實驗，樣品存放時間越長，細(xì)胞分離效果越差。樣品放置超過 6h 后
 
分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。
 

• 本實驗最好不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品
  ，應(yīng)使用無靜電
  、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品
  ，因為靜電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁
  、堿處理的玻璃表面會變成毛面
  ，影響細(xì)胞分離效果
  。

 

• 吸取過多的目的細(xì)胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加。

 

• 分離液用量大于骨髓單細(xì)胞懸液樣本量時
  ，分離效果更佳
  。

 

• 如實驗后細(xì)胞得率或活性過低
  ，請聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助。

 
【儲存條件及有效期】
 
常溫保存