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產(chǎn)品類(lèi)別：巨核細(xì)胞的分離
 
產(chǎn)品編號(hào)：MAG2014CA
 
產(chǎn)品名稱(chēng)：貓巨核細(xì)胞分離液試劑盒
 
產(chǎn)品規(guī)格：2X200ml/Kit
 
產(chǎn)品價(jià)格：￥1100.00元
 
本品用于分離貓巨核細(xì)胞







“XXXX”動(dòng)物巨核細(xì)胞分離液實(shí)驗(yàn)方法
 
技術(shù)文檔編號(hào)：TBD0050SOP
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
2×200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶(hù)使用，試劑內(nèi)容如下：
 

	名稱(chēng)	產(chǎn)品編號(hào)	規(guī)格
A	分離液 1		200ml
B	分離液 2		200ml
C	樣本稀釋液（贈(zèng)品）	2010C1119	200ml
D	清洗液（贈(zèng)品）	2010X1118	200ml
E	F 液（贈(zèng)品）	F2013TBD	200ml
F	說(shuō)明書(shū)		1 份

 
【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
 
適用儀器：最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
 
【檢驗(yàn)方法】
 
全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
 

• 首先制備骨髓單細(xì)胞懸液，制備方法詳見(jiàn)“骨髓沖洗單細(xì)胞懸液制備技術(shù)”
  。

 

• 取一支 15ml 離心管，先加入 3ml 分離液 1 后加入 2ml 分離液 2
  ，制成梯度界面。

 

• 用吸管小心吸取骨髓單細(xì)胞懸液加于分離液液面上
  ，400-500g，離心 20-30min
  。（注：根據(jù)骨髓單細(xì)胞懸液量確定離心條件，骨髓單細(xì)胞懸液量越大
  ，離心力越大，離心時(shí)間越長(zhǎng)

  ，具體離心條件需客戶(hù)自行摸索

  ，以達(dá)到最佳分離效果）

  。
• 離心后，此時(shí)離心管中將出現(xiàn)兩層環(huán)狀乳白色細(xì)胞層
  。

 

• 用吸管小心吸取上層環(huán)狀乳白色目的細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中
  ，向離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118）

  ，混勻細(xì)胞

  。

 

• 250g
  ，離心 10min。

 

• 棄上清
  。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118）重懸所得細(xì)胞。

 

• 250g
  ，離心 10min。

10. 重復(fù) 7、8、9，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。
 
分離圖例
 

【差異貼壁法純化細(xì)胞】
 
（1）用巨核細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基（產(chǎn)品編號(hào)：MEGTBD2015）或巨核細(xì)胞完全培養(yǎng)基（產(chǎn)
 
品編號(hào)：HMEGTBD2015）以 1.5-3×10⁶ 個(gè)/ml 的密度重懸細(xì)胞，將細(xì)胞鋪于一次性細(xì)
 
胞板或細(xì)胞瓶中，放于 37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。
 
（2）2-4 小時(shí)內(nèi)貼壁的為巨噬細(xì)胞前體（俗稱(chēng)為單核細(xì)胞）。
 
（3）10-24 小時(shí)內(nèi)貼壁的單個(gè)核細(xì)胞為內(nèi)皮、內(nèi)皮祖細(xì)胞