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中文名稱：貓骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞分離液試劑盒
中文別名：貓骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞分離液試劑盒

產(chǎn)品類別：骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞的分離

產(chǎn)品編號：VE2012CAPG

產(chǎn)品名稱：貓骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞分離液試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：2X200ml/Kit

產(chǎn)品價格：￥1050.00元

本品用于分離貓骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞

“XXXX”動物骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞分離液實驗方法

技術(shù)文檔編號：TBD0045SOP

【產(chǎn)品規(guī)格】

2×200ml/Kit

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶使用

，試劑內(nèi)容如下：

	名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格

A	分離液 1		200ml

B	分離液 2		200ml

C	樣本稀釋液（贈品）	2010C1119	200ml

D	清洗液（贈品）	2010X1118	200ml
E	F 液（贈品）	F2013TBD	200ml
F	說明書		1 份

【實驗前準(zhǔn)備】

適用儀器：最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機

【檢驗方法】

全過程樣本

、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行

。

首先制備骨髓單細(xì)胞懸液，制備方法詳見“骨髓沖洗單細(xì)胞懸液制備技術(shù)（文檔編號：

TBD0004SOP）”

。

取一支離心管，依次小心加入分離液 1
、分離液 2（體積比為 3:1
，試劑總量與細(xì)胞懸液體積比為 2：1。如細(xì)胞懸液為 2ml
，則先后加入分離液 1：3ml、分離液 2：1ml
。試劑總量最少不低于 4ml
。）
，制成梯度界面，各液面分層一定要清晰
。

用吸管小心吸取細(xì)胞懸液加于分離液液面上，500g
，離心 20-30min（注：根據(jù)樣本量確定離心條件
，血液樣本量越多，離心力越大
，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索
，以達(dá)到最佳分離效果）
。

離心后，此時離心管中由上至下分為六層
。第一層為稀釋液層。第二層為環(huán)狀乳白色內(nèi)皮祖細(xì)胞層（第一層白環(huán)及上層 50%分離液 2）
。第三層為環(huán)狀乳白色單個核細(xì)胞層（下層 50%分離液 2 及第二層白環(huán)）
。第四層為透明分離液 1 液層。第五層為粒細(xì)胞層
。第六層為紅細(xì)胞層。

用吸管小心吸取第二層到另一 15ml 離心管中
，往所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）
，混勻細(xì)胞。

250g
，離心 10min
。

棄上清
。

用吸管以 5-10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細(xì)胞
。

250g，離心 10min
。

重復(fù) 7、8
、9
，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。

分離圖例：

【差異貼壁法純化細(xì)胞】

（1）用內(nèi)皮祖細(xì)胞無血清培養(yǎng)基（產(chǎn)品編號：TBD20180012）或內(nèi)皮祖細(xì)胞完全培養(yǎng)

基（產(chǎn)品編號：TBD20180052）以 1.5-3×10⁶ 個/ml 的密度重懸細(xì)胞

，將細(xì)胞鋪于一次

性細(xì)胞板或細(xì)胞瓶中

，放于 37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中進行貼壁培養(yǎng)。

（2）2-4 小時內(nèi)貼壁的為巨噬細(xì)胞前體（俗稱為單核細(xì)胞）

。

（3）10-24 小時內(nèi)貼壁的單個核細(xì)胞為內(nèi)皮

、內(nèi)皮祖細(xì)胞、干細(xì)胞

。

（4）不貼壁的為淋巴細(xì)胞。

注：

無血清培養(yǎng)基中不含任何動物成分
，為得到更佳培養(yǎng)效果可添加 10%自體血漿或2-8%經(jīng)篩選的胎牛血清
。

完全培養(yǎng)基中含 2-20%胎牛血清（血清具體含量由所培養(yǎng)的目的細(xì)胞而定）。

由于每種細(xì)胞的貼壁時間存在差異可將所得細(xì)胞分開已達(dá)簡單的純化目的
，此法成

本相對較低。如需獲得高純度目的細(xì)胞則需在使用分離液后選用免疫磁珠陽性或陰

性分選

。

【注意事項】

全過程樣本
、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行
。為獲得最佳的實驗結(jié)果
，最好在取樣 2h 內(nèi)進行實驗
，樣品存放時間越長
，細(xì)胞分離效果越差。樣品放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的
。

本實驗最好不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品
，應(yīng)使用無靜電
、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品
，因為靜電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面
，影響細(xì)胞分離效果
。

吸取過多的目的細(xì)胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加
。

分離液用量大于骨髓單細(xì)胞懸液樣本時
，分離效果更佳。

如實驗后細(xì)胞得率或活性過低
，請聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助
。

【儲存條件及有效期】

常溫保存

，有效期 2 年

。本品易感染細(xì)菌

，需無菌條件操作。無菌條件下操作

，啟

封后置常溫保存

。如 4℃保存

，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶

，影響分離效果。

【參考值（參考范圍）】

本實驗內(nèi)皮祖細(xì)胞提取率大于 80%

。

下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例

，用戶可適當(dāng)進行參考

。

	紅細(xì)胞		白細(xì)胞		血小板

		（4.0-10.0）×10⁹
含量（個/L）	（4.0-5.5）×10¹²	中性粒細(xì)胞	淋巴細(xì)胞	單核細(xì)胞	（1.0-3.0）×10¹¹
		50%-70%	20%-40%	3%-8%

【相關(guān)實驗技術(shù)方案】

骨髓沖洗單細(xì)胞懸液制備技術(shù)
。

所獲得內(nèi)皮祖細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。

所獲得內(nèi)皮祖細(xì)胞的核酸提取技術(shù)
。

所獲得內(nèi)皮祖細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)

B.免疫組化技術(shù)

C.原位雜交技術(shù)

D.PCR 技術(shù)

【可能存在的問題及解決方法】

1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：

出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因	建議解決方案

離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層	轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短	適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長
離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長

離心后白環(huán)層彌散	細(xì)胞密度過大	調(diào)整細(xì)胞密度

離心后白環(huán)層太淺或看不見	細(xì)胞密度過小
離心后白環(huán)層太淺或看不見	細(xì)胞密度過小

本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心
，其密度與溫度
、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進行適當(dāng)調(diào)整
。建議對離心條件進行調(diào)整時
，恒定離心時間，對離心轉(zhuǎn)速進行調(diào)整
。

本分離液依照國際標(biāo)準(zhǔn)
，全部使用藥用級原料，性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同
，可能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況
，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。

注：在對離心條件進行調(diào)整時

，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)

，直至達(dá)到最佳分離效果，

離心力最小不得小于 400g

，最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準(zhǔn)

。

技術(shù)支持：庫價化學(xué)(KuuJia)

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別名	貓骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞分離液試劑盒
英文名