產(chǎn)品類別：骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞的分離
 
產(chǎn)品編號：VE2012DKG
 
產(chǎn)品名稱：狗骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞分離液試劑盒
 
產(chǎn)品規(guī)格：2X200ml/Kit
 
產(chǎn)品價(jià)格：￥850.00元
 
 
本品用于分離狗骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞



“XXXX”動(dòng)物骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞分離液實(shí)驗(yàn)方法
 
 
技術(shù)文檔編號：TBD0045SOP
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
2×200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
 

	名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格
A	分離液 1		200ml
B	分離液 2		200ml
C	樣本稀釋液（贈品）	2010C1119	200ml
D	清洗液（贈品）	2010X1118	200ml
E	F 液（贈品）	F2013TBD	200ml
F	說明書		1 份

 
【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
 
適用儀器：最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
 
【檢驗(yàn)方法】
 
全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
 

• 首先制備骨髓單細(xì)胞懸液
  ，制備方法詳見“骨髓沖洗單細(xì)胞懸液制備技術(shù)（文檔編號：

 
TBD0004SOP）”。
 

• 取一支離心管，依次小心加入分離液 1
  、分離液 2（體積比為 3:1
  ，試劑總量與細(xì)胞懸液體積比為 2：1。如細(xì)胞懸液為 2ml
  ，則先后加入分離液 1：3ml
  、分離液 2：1ml
  。試劑總量最少不低于 4ml。）
  ，制成梯度界面
  ，各液面分層一定要清晰。

 

• 用吸管小心吸取細(xì)胞懸液加于分離液液面上
  ，500g
  ，離心 20-30min（注：根據(jù)樣本量確定離心條件，血液樣本量越多
  ，離心力越大
  ，離心時(shí)間越長，具體離心條件需客戶自行摸索
  ，以達(dá)到最佳分離效果）

  。

 

• 離心后，此時(shí)離心管中由上至下分為六層
  。第一層為稀釋液層

  。第二層為環(huán)狀乳白色內(nèi)皮祖細(xì)胞層（第一層白環(huán)及上層 50%分離液 2）。第三層為環(huán)狀乳白色單個(gè)核細(xì)胞層（下層 50%分離液 2 及第二層白環(huán)）

  。第四層為透明分離液 1 液層

  。第五層為粒細(xì)胞層。第六層為紅細(xì)胞層

  。

• 用吸管小心吸取第二層到另一 15ml 離心管中，往所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）
  ，混勻細(xì)胞
  。

 

• 250g，離心 10min
  。

 

• 棄上清
  。

 

• 用吸管以 5-10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細(xì)胞。

 

• 250g
  ，離心 10min
  。

 

• 重復(fù) 7、8
  、9
  ，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。

 
分離圖例：
 
 
 
【差異貼壁法純化細(xì)胞】
 
（1）用內(nèi)皮祖細(xì)胞無血清培養(yǎng)基（產(chǎn)品編號：TBD20180012）或內(nèi)皮祖細(xì)胞完全培養(yǎng)
 
基（產(chǎn)品編號：TBD20180052）以 1.5-3×10⁶ 個(gè)/ml 的密度重懸細(xì)胞，將細(xì)胞鋪于一次
 
性細(xì)胞板或細(xì)胞瓶中，放于 37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。
 
（2）2-4 小時(shí)內(nèi)貼壁的為巨噬細(xì)胞前體（俗稱為單核細(xì)胞）。
 
（3）10-24 小時(shí)內(nèi)貼壁的單個(gè)核細(xì)胞為內(nèi)皮、內(nèi)皮祖細(xì)胞、干細(xì)胞。
 
（4）不貼壁的為淋巴細(xì)胞。
 
注：
 

• 無血清培養(yǎng)基中不含任何動(dòng)物成分
  ，為得到更佳培養(yǎng)效果可添加 10%自體血漿或2-8%經(jīng)篩選的胎牛血清。

 

• 完全培養(yǎng)基中含 2-20%胎牛血清（血清具體含量由所培養(yǎng)的目的細(xì)胞而定）
  。

 

• 由于每種細(xì)胞的貼壁時(shí)間存在差異可將所得細(xì)胞分開已達(dá)簡單的純化目的
  ，此法成

 

本相對較低。如需獲得高純度目的細(xì)胞則需在使用分離液后選用免疫磁珠陽性或陰
 
性分選