產(chǎn)品類別：外周血樹突狀細胞的分離
 
產(chǎn)品編號：DC2012HK
 
產(chǎn)品名稱：人外周血和臍帶血樹突狀細胞分離液試劑盒
 
產(chǎn)品規(guī)格：2X200ml/Kit
 
產(chǎn)品價格：￥850.00元
 
本品用于分離人外周血和臍帶血樹突狀細胞


“XXXX”動物外周血樹突狀細胞分離液實驗方法
 
技術(shù)文檔編號：TBD0041SOP
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
2×200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
 

	名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格
A	分離液 1		200ml
B	分離液 2		200ml
C	清洗液（贈品）	2010X1118	200ml
D	說明書		1 份

 
【實驗前準(zhǔn)備】
 
適用儀器:最大離心力可達 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。
 
方法一（需留取血漿備用）
 

• 首先取抗凝血 250g 離心 10min，棄血漿
  ，補加胎牛血清（添加量與棄去血漿量等同）制成細胞懸液
  ，根據(jù)細胞懸液液體體積，選擇適當(dāng)離心管進行試驗
  。

 

• 取一支離心管
  ，依次小心加入分離液 1、分離液 2（體積比為 3:1
  ，試劑總量與細胞懸液體積比為 2：1
  。如細胞懸液為 2ml，則先后加入分離液 1：3ml
  、分離液 2：1ml
  。試劑總量最少不低于 4ml。）

  ，制成梯度界面

  ，各液面分層一定要清晰。

 

• 用吸管小心吸取細胞懸液加于分離液液面上
  ，400-500g

  ，離心 20-30min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液樣本量越多

  ，離心力越大

  ，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索

  ，以達到最佳分離效果）

  。

 

• 離心后，此時離心管中由上至下分為六層
  。第一層為稀釋液層

  。第二層為環(huán)狀乳白色樹突狀細胞層（第一層白環(huán)及上層 50%分離液 2）。第三層為環(huán)狀乳白色單個核細胞層（下層 50%分離液 2 及第二層白環(huán)）

  。第四層為透明分離液 1 液層

  。第五層為粒細胞層

  。第六層為紅細胞層

  。

 

• 用吸管小心吸取第二層到另一 15ml 離心管中，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品

編號：2010X1118），混勻細胞。
 

• 250g，離心 10min
  。

 

• 棄上清
  。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細胞
  。

 

• 250g，離心 10min
  。

 

• 重復(fù) 6
  、7、8
  ，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細胞
  。

 
分離圖例：
 

 
方法二（不需血漿留存?zhèn)溆茫?br />  

• 根據(jù)新鮮抗凝全血樣本量選取一支離心管，依次小心加入分離液 1
  、分離液 2（體積比為 3:1
  ，試劑總量與抗凝血體積比為 2：1。如抗凝血為 2ml

  ，則先后加入分離液 1：3ml

  、分離液 2：1ml。試劑總量最低不低于 4ml

  。）

  ，制成梯度界面，各液面分層一定要清晰

  。
• 用吸管小心吸取抗凝血加于分離液液面上
  ，400-500g，離心 20-30min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件

  ，血液樣本量越多

  ，離心力越大，離心時間越長

  ，具體離心條件需客戶自行摸索

  ，以達到最佳分離效果）。

 

• 離心后
  ，此時離心管中由上至下分為六層

  。第一層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色樹突狀細胞層（第一層白環(huán)及上層 50%分離液 2）

  。第三層為環(huán)狀乳白色單個核細胞層（下層50%分離液 2 及第二層白環(huán)）

  。第四層為透明分離液 1 液層。第五層為粒細胞層

  。第六層為紅細胞層

  。

 

• 后續(xù)步驟同方法一。

 
【差異貼壁法純化細胞】

（1）用樹突狀細胞無血清培養(yǎng)基（產(chǎn)品編號：CDC2015）或樹突狀細胞完全培養(yǎng)基（產(chǎn)
 
品編號：HCDC2015）以 1.5-3×10⁶ 個/ml 的密度重懸細胞