產(chǎn)品類別：造血干細(xì)胞的分離
 
產(chǎn)品編號(hào)：LGS1081W
 
產(chǎn)品名稱：小鼠外周血造血干細(xì)胞分離液KIT
 
產(chǎn)品規(guī)格：200ml/KIT
 
產(chǎn)品價(jià)格：￥500.00元

本品用于分離小鼠外周血造血干細(xì)胞



“XXXX”動(dòng)物外周血干細(xì)胞分離液實(shí)驗(yàn)方法
 
 
 
 
技術(shù)文檔編號(hào)：TBD0029SOP
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
 

	名稱	產(chǎn)品編號(hào)	規(guī)格
A	XXXX 動(dòng)物外周血干細(xì)胞分離液		200ml
B	樣本稀釋液（贈(zèng)品）	2010C1119	200ml
C	清洗液（贈(zèng)品）	2010X1118	200ml
D	說(shuō)明書		1 份

 
【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
 
適用儀器:最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
 
【檢驗(yàn)方法】
 
全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
 
首先取抗凝血按體積比 1:1 的比例加樣本稀釋液（產(chǎn)品編號(hào)：2010C1119）混勻，
 
根據(jù)稀釋后的樣本量大小，分以下兩種情況：
 
情況 A：稀釋后的血液樣本量小于 5ml 時(shí)

，實(shí)驗(yàn)方法如下：
 

• 取一支 15ml 離心管，先加入與稀釋后樣本等量的分離液（注：分離液最少不得少于 3ml）
  。

 

• 用吸管小心吸取稀釋后的血液樣本加于分離液液面上
  ，400-500g ，離心 20-30min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件
  ，血液樣本量越多
  ，離心力越大，離心時(shí)間越長(zhǎng)
  ，具體離心條件需客戶自行摸索
  ，以達(dá)到最佳分離效果）
  。

 

• 離心后，此時(shí)離心管中由上至下分為四層
  。第一層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色目的細(xì)胞層
  。第三層為透明分離液層
  。第四層為紅細(xì)胞層。

 

• 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色目的細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中
  ，往所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118）
  ，混勻細(xì)胞。

 

• 250g
  ，離心 10min
  。

 

• 棄上清。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118）重懸所得細(xì)胞
  。

 

• 250g
  ，離心 10min。

 

• 重復(fù) 6
  、7
  、8，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞
  。

 
情況 B：稀釋后的血液樣本量大于等于 5ml 時(shí)

，實(shí)驗(yàn)方法如下：
 

• 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管，先加入與稀釋后樣本等量的分離液
  。

 

• 將經(jīng)稀釋后的血液樣本小心加于分離液之液面上
  ，450-650g（最大離心力可至 1000g），離心 20-30min

  。（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件

  ，血液量越多，離心力越大

  ，離心時(shí)間越長(zhǎng)

  ，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果

  。加入血液樣本后

  ，樣本及分離液總體積不得超過(guò)離心管總體積的三分之二）。

 

• 剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 至步驟 9
  。

 
分離圖例：
 
 
【差異貼壁法純化細(xì)胞】
 
（1）用干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基（產(chǎn)品編號(hào)：CSC2015TBD）或干細(xì)胞完全培養(yǎng)基（產(chǎn)品
 
編號(hào)：HCSC2015TBD）以 1.5-3×10⁶ 個(gè)/ml 的密度重懸細(xì)胞，將細(xì)胞鋪于一次性細(xì)胞板
 
或細(xì)胞瓶中，放于 37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。
 
（2）2-4 小時(shí)內(nèi)貼壁的為巨噬細(xì)胞前體（俗稱為單核細(xì)胞）。
 
（3）10-24 小時(shí)內(nèi)貼壁的單個(gè)核細(xì)胞為內(nèi)皮、內(nèi)皮祖細(xì)胞、干細(xì)胞。
 
（4）不貼壁的為淋巴細(xì)胞。
 
注：
 

• 無(wú)血清培養(yǎng)基中不含任何動(dòng)物成分，為得到更佳培養(yǎng)效果可添加 10%自體血漿或

 
2-8%經(jīng)篩選的胎牛血清。
 
b) 完全培養(yǎng)基中含 2-20%胎牛血清（血清具體含量由所培養(yǎng)的目的細(xì)胞而定）。
 
由于每種細(xì)胞的貼壁時(shí)間存在差異可將所得細(xì)胞分開已達(dá)簡(jiǎn)單的純化目的，此法成本相對(duì)較
 
低。如需獲得高純度目的細(xì)胞則需在使用分離液后選用免疫磁珠陽(yáng)性或陰性分選。
 
【注意事項(xiàng)】
 

• 全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行
  。為獲得最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果
  ，最好在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，血液存放時(shí)間越長(zhǎng)
  ，細(xì)胞分離效果越差
  。血液放置超過(guò) 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。

 

• 本實(shí)驗(yàn)最好不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品
  ，應(yīng)使用無(wú)靜電
  、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁

  、堿處理的玻璃表面會(huì)變成毛面

  ，影響細(xì)胞分離效果。

 

• 吸取過(guò)多的目的細(xì)胞層及分離液層會(huì)導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加
  。

 

• 吸取過(guò)多的目的細(xì)胞層上層溶液會(huì)導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜
  。

 

• 分離液用量大于稀釋后的血液樣本時(shí)，分離效果更佳
  。

 

• 如實(shí)驗(yàn)后干細(xì)胞得率或活性過(guò)低
  ，請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助。

 
【儲(chǔ)存條件及有效期】
 
常溫保存