產(chǎn)品類別：造血干細(xì)胞的分離
 
產(chǎn)品編號(hào)：LGS1090W
 
產(chǎn)品名稱：兔外周血造血干細(xì)胞分離液KIT
 
產(chǎn)品規(guī)格：200ml/KIT
 
產(chǎn)品價(jià)格：￥500.00元

本品用于分離兔外周血造血干細(xì)胞

“XXXX”動(dòng)物外周血干細(xì)胞分離液實(shí)驗(yàn)方法
 
 
 
 
技術(shù)文檔編號(hào)：TBD0029SOP
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
 

	名稱	產(chǎn)品編號(hào)	規(guī)格
A	XXXX 動(dòng)物外周血干細(xì)胞分離液		200ml
B	樣本稀釋液（贈(zèng)品）	2010C1119	200ml
C	清洗液（贈(zèng)品）	2010X1118	200ml
D	說明書		1 份

 
【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
 
適用儀器:最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
 
【檢驗(yàn)方法】
 
全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
 
首先取抗凝血按體積比 1:1 的比例加樣本稀釋液（產(chǎn)品編號(hào)：2010C1119）混勻，
 
根據(jù)稀釋后的樣本量大小，分以下兩種情況：
 
情況 A：稀釋后的血液樣本量小于 5ml 時(shí)

，實(shí)驗(yàn)方法如下：
 

• 取一支 15ml 離心管，先加入與稀釋后樣本等量的分離液（注：分離液最少不得少于 3ml）
  。

 

• 用吸管小心吸取稀釋后的血液樣本加于分離液液面上
  ，400-500g ，離心 20-30min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件
  ，血液樣本量越多，離心力越大
  ，離心時(shí)間越長
  ，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果）
  。

 

• 離心后，此時(shí)離心管中由上至下分為四層
  。第一層為血漿層
  。第二層為環(huán)狀乳白色目的細(xì)胞層。第三層為透明分離液層
  。第四層為紅細(xì)胞層
  。

 

• 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色目的細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中
  ，往所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118）
  ，混勻細(xì)胞。

 

• 250g
  ，離心 10min
  。

 

• 棄上清
  。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118）重懸所得細(xì)胞
  。

 

• 250g，離心 10min
  。

 

• 重復(fù) 6
  、7
  、8
  ，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞
  。

 
情況 B：稀釋后的血液樣本量大于等于 5ml 時(shí)，實(shí)驗(yàn)方法如下：
 

• 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管
  ，先加入與稀釋后樣本等量的分離液
  。

 

• 將經(jīng)稀釋后的血液樣本小心加于分離液之液面上
  ，450-650g（最大離心力可至 1000g）
  ，離心 20-30min。（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件
  ，血液量越多，離心力越大
  ，離心時(shí)間越長，具體離心條件需客戶自行摸索
  ，以達(dá)到最佳分離效果

  。加入血液樣本后，樣本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二）

  。

 

• 剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 至步驟 9
  。

 
分離圖例：
 
 
【差異貼壁法純化細(xì)胞】
 
（1）用干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基（產(chǎn)品編號(hào)：CSC2015TBD）或干細(xì)胞完全培養(yǎng)基（產(chǎn)品
 
編號(hào)：HCSC2015TBD）以 1.5-3×10⁶ 個(gè)/ml 的密度重懸細(xì)胞