產(chǎn)品類別：間充質(zhì)干細(xì)胞的分離
 
產(chǎn)品編號：LGS1090
 
產(chǎn)品名稱：兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液KIT
 
產(chǎn)品規(guī)格：200ml/KIT
 
產(chǎn)品價格：￥500.00元

本品用于分離兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

“XXXX”動物骨髓干細(xì)胞分離液實驗方法
 
技術(shù)文檔編號：TBD0030SOP
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
 

	名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格
A	XXXX 動物骨髓干細(xì)胞分離液		200ml
B	樣本稀釋液（贈品）	2010C1119	200ml
C	清洗液（贈品）	2010X1118	200ml
D	F 液（贈品）	F2013TBD	200ml
E	說明書		1 份

 
【實驗前準(zhǔn)備】
 
適用儀器:最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
 

• 首先制備骨髓單細(xì)胞懸液
  ，制備方法詳見“骨髓沖洗單細(xì)胞懸液制備技術(shù)”。

 

• 取一支 15ml 離心管
  ，加入與骨髓單細(xì)胞懸液等量的分離液（注：分離液最少不得少于

 
3ml）。
 

• 用吸管小心吸取骨髓單細(xì)胞懸液加于分離液液面上
  ，400-550g
  ，離心 20-30min。（注：根據(jù)骨髓單細(xì)胞懸液量確定離心條件
  ，骨髓單細(xì)胞懸液量越大，離心力越大
  ，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索

  ，以達(dá)到最佳分離效果）

  。

 

• 離心后
  ，此時離心管中由上至下分為四層

  。第一層為稀釋液層。第二層為環(huán)狀乳白色目的細(xì)胞層

  。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層

  。

 

• 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色目的細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中
  ，向離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細(xì)胞
  。
• 250g，離心 10min
  。

 

• 棄上清
  。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細(xì)胞。

• 250g，離心 10min
  。

 

• 重復(fù) 7
  、8、9
  ，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞
  。

 
 
 
 
【差異貼壁法純化細(xì)胞】
 
（1）用干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基（產(chǎn)品編號：CSC2015TBD）或干細(xì)胞完全培養(yǎng)基（產(chǎn)品
 
編號：HCSC2015TBD）以 1.5-3×10⁶ 個/ml 的密度重懸細(xì)胞，將細(xì)胞鋪于一次性細(xì)胞板
 
或細(xì)胞瓶中，放于 37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。
 
（2）2-4 小時內(nèi)貼壁的為巨噬細(xì)胞前體（俗稱為單核細(xì)胞）。
 
（3）10-24 小時內(nèi)貼壁的單個核細(xì)胞為內(nèi)皮、內(nèi)皮祖細(xì)胞、干細(xì)胞。
 
（4）不貼壁的為淋巴細(xì)胞。
 
注：
 

• 無血清培養(yǎng)基中不含任何動物成分
  ，為得到更佳培養(yǎng)效果可添加 10%自體血漿或2-8%經(jīng)篩選的胎牛血清。
• 完全培養(yǎng)基中含 2-20%胎牛血清（血清具體含量由所培養(yǎng)的目的細(xì)胞而定）
  。

 

• 由于每種細(xì)胞的貼壁時間存在差異可將所得細(xì)胞分開已達(dá)簡單的純化目的
  ，此法成本相對較低。如需獲得高純度目的細(xì)胞則需在使用分離液后選用免疫磁珠陽性或陰

 
性分選。
 
【注意事項】
 

• 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行
  。為獲得最佳的實驗結(jié)果
  ，最好在取樣 2h 內(nèi)進(jìn)行實驗，樣品存放時間越長
  ，細(xì)胞分離效果越差。樣品放置超過 6h 后

分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的    

	1.   由于血液粘度 、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：
	出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因	建議解決方案
	離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層	轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短	適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速
	離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長
	離心后白環(huán)層彌散	細(xì)胞密度過大	調(diào)整細(xì)胞密度
	離心后白環(huán)層太淺或看不見	細(xì)胞密度過小

 

• 本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度
  、大氣壓等密切相關(guān)

  。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整

  。建議對離心條件進(jìn)行調(diào)整時，恒定離心時間

  ，對離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整

  。

 

• 本分離液依照國際標(biāo)準(zhǔn)
  ，全部使用藥用級原料

  ，性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況

  ，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速

  。

 
注：在對離心條件進(jìn)行調(diào)整時，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)