產(chǎn)品類別：間充質(zhì)干細(xì)胞的分離
 
產(chǎn)品編號(hào)：LGS107305
 
產(chǎn)品名稱：人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液KIT 醫(yī)用級(jí) 內(nèi)毒素<0.5EU
 
產(chǎn)品規(guī)格：200ml/KIT
 
產(chǎn)品價(jià)格：￥1800.00元


本品用于分離人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
 
樣本密度分離液（人骨髓干細(xì)胞分離液）實(shí)驗(yàn)方法
 
 
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
 

	名稱	產(chǎn)品編號(hào)	規(guī)格
A	XXXX 動(dòng)物骨髓干細(xì)胞分離液		200ml
B	樣本稀釋液（贈(zèng)品）	2010C1119	200ml
C	清洗液（贈(zèng)品）	2010X1118	200ml
D	F 液（贈(zèng)品）	F2013TBD	200ml
E	說(shuō)明書(shū)		1 份

 
【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
 
適用儀器：最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
 
【檢驗(yàn)方法】
 
全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
 

• 首先制備骨髓單細(xì)胞懸液，制備方法詳見(jiàn)“骨髓沖洗單細(xì)胞懸液制備技術(shù)”
  。

 

• 取一支 15ml 離心管
  ，加入與骨髓單細(xì)胞懸液等量的分離液（注：分離液最少不得少于

 
3ml）。
 

• 用吸管小心吸取骨髓單細(xì)胞懸液加于分離液液面上
  ，400-550g，離心 20-30min。（注：根據(jù)骨髓單細(xì)胞懸液量確定離心條件
  ，骨髓單細(xì)胞懸液量越大，離心力越大
  ，離心時(shí)間越長(zhǎng)
  ，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果）
  。

 

• 離心后，此時(shí)離心管中由上至下分為四層
  。第一層為稀釋液層
  。第二層為環(huán)狀乳白色目的細(xì)胞層
  。第三層為透明分離液層

  。第四層為紅細(xì)胞層

  。

 

• 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色目的細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中
  ，向離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118），混勻細(xì)胞
  。

 

• 250g，離心 10min
  。

 

• 棄上清
  。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118）重懸所得細(xì)胞
  。

 

• 250g
  ，離心 10min。

10. 重復(fù) 7、8、9，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。
 
分離圖例：
 
 

 
【差異貼壁法純化細(xì)胞】
 
（1）用干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基（產(chǎn)品編號(hào)：CSC2015TBD）或干細(xì)胞完全培養(yǎng)基（產(chǎn)品編號(hào)：
 
HCSC2015TBD）以 1.5-3×10⁶ 個(gè)/ml 的密度重懸細(xì)胞，將細(xì)胞鋪于一次性細(xì)胞板或細(xì)胞瓶中，
 
放于 37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。
 
（2）2-4 小時(shí)內(nèi)貼壁的為巨噬細(xì)胞前體（俗稱為單核細(xì)胞）。
 
（3）10-24 小時(shí)內(nèi)貼壁的單個(gè)核細(xì)胞為內(nèi)皮、內(nèi)皮祖細(xì)胞、干細(xì)胞。
 
（4）不貼壁的為淋巴細(xì)胞。
 
注：
 

• 無(wú)血清培養(yǎng)基中不含任何動(dòng)物成分，為得到更佳培養(yǎng)效果可添加 10%自體血漿或2-8%經(jīng)篩選的胎牛血清
  。
• 完全培養(yǎng)基中含 2-20%胎牛血清（血清具體含量由所培養(yǎng)的目的細(xì)胞而定）
  。

 

• 由于每種細(xì)胞的貼壁時(shí)間存在差異可將所得細(xì)胞分開(kāi)已達(dá)簡(jiǎn)單的純化目的，此法成本相對(duì)較低
  。如需獲得高純度目的細(xì)胞則需在使用分離液后選用免疫磁珠陽(yáng)性或陰

 
性分選