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中文名稱：貓外周血白細(xì)胞分離液試劑盒（分子生物學(xué)及細(xì)胞培養(yǎng)專用）
中文別名：貓外周血白細(xì)胞分離液試劑盒（分子生物學(xué)及細(xì)胞培養(yǎng)專用）

產(chǎn)品類別：外周血白細(xì)胞的分離

產(chǎn)品編號(hào)：WBC1078C

產(chǎn)品名稱：貓外周血白細(xì)胞分離液試劑盒（分子生物學(xué)及細(xì)胞培養(yǎng)專用）

產(chǎn)品規(guī)格：200ml/KIT

產(chǎn)品價(jià)格：￥1050元

本品用于分離貓外周血白細(xì)胞

“XXXX”動(dòng)物外周血白細(xì)胞分離液實(shí)驗(yàn)方法

（細(xì)胞培養(yǎng)及分子生物學(xué)專用）

技術(shù)文檔編號(hào)：TBD0031SOP

【產(chǎn)品規(guī)格】

200ml/Kit

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：

	名稱	產(chǎn)品編號(hào)	規(guī)格

A	XXXX 動(dòng)物外周血白細(xì)胞分離液		200ml

B	樣本稀釋液（贈(zèng)品）	2010C1119	200ml

C	清洗液（贈(zèng)品）	2010X1118	200ml

D	紅細(xì)胞裂解液（贈(zèng)品）	NH4CL2009	100ml
E	說(shuō)明書(shū)		1 份

【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】

適用儀器：最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)

【檢驗(yàn)方法】

全過(guò)程樣本

、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行

。

首先取抗凝血，根據(jù)樣本量大小

，分以下兩種情況：

情況 A：血液樣本量小于 5ml 時(shí)

，實(shí)驗(yàn)方法如下：

取一支 15ml 離心管，先加入 5ml 分離液

用吸管小心吸取血液樣本加于分離液液面上
，500-800g
，離心 20-30min（注：如改變血液樣本及分離液用量，需相應(yīng)調(diào)整離心力及離心時(shí)間
，具體離心條件需客戶自行摸索
，以達(dá)到最佳分離效果。）

離心后用吸管小心吸取所有環(huán)狀乳白色細(xì)胞層（一層或兩層）
，加入 10 ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118）
，混勻細(xì)胞。250g
，離心 10min
。重復(fù)洗滌 2-3 次，即得所需白細(xì)胞
。

如有紅細(xì)胞殘留請(qǐng)使用紅細(xì)胞裂解液（產(chǎn)品編號(hào)：NH4CL2009）裂解紅細(xì)胞
，具體操

作方法詳見(jiàn)“紅細(xì)胞裂解液使用說(shuō)明”。

情況 B：血液樣本量大于等于 5ml 時(shí)

，實(shí)驗(yàn)方法如下：

取一支適當(dāng)?shù)碾x心管
，先加入與樣本等量的分離液。

將血液樣本小心加于分離液之液面上
，550-850g（最大離心力可至 1000g）
，離心20-30min
。（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液量越多
，離心力越大
，離心時(shí)間越長(zhǎng)，具體離心條件需客戶自行摸索
，以達(dá)到最佳分離效果
。加入血液樣本后，樣本及分離液總體積不得超過(guò)離心管總體積的三分之二）
。

剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 與步驟 4
。

【注意事項(xiàng)】

全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行
。為獲得最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果
，最好在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，血液存放時(shí)間越長(zhǎng)
，細(xì)胞分離效果越差
。血液放置超過(guò) 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。

本實(shí)驗(yàn)最好不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品
，應(yīng)使用無(wú)靜電
、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁
、堿處理的玻璃表面會(huì)變成毛面
，影響細(xì)胞分離效果。

分離液用量大于稀釋后血液樣本時(shí)
，分離效果更佳
。

當(dāng)血液樣本粘度過(guò)高需稀釋時(shí)，最優(yōu)稀釋方法：將血液與樣本稀釋液（產(chǎn)品編號(hào)：2010C1119）1:1 稀釋混勻備用
。注：不當(dāng)?shù)南♂尫椒〞?huì)降低細(xì)胞得率及活性
。如血液樣本經(jīng)過(guò)稀釋則分離過(guò)程中需適當(dāng)降低離心力和離心時(shí)間。

如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過(guò)低
，請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助
。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

常溫保存，有效期 2 年

。本品易感染細(xì)菌

，需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作

，啟

封后置常溫保存

。如 4℃保存

，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶

，影響分離效果

。

【參考值（參考范圍）】

本實(shí)驗(yàn)白細(xì)胞提取率及純度大于 80%。

下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例

，用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考

。

	紅細(xì)胞		白細(xì)胞		血小板

		（4.0-10.0）×10⁹
含量（個(gè)/L）	（4.0-5.5）×10¹²	中性粒細(xì)胞	淋巴細(xì)胞	單核細(xì)胞	（1.0-3.0）×10¹¹
		50%-70%	20%-40%	3%-8%

【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】

所獲得白細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。

所獲得白細(xì)胞的核酸提取技術(shù)
。

所獲得白細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)

C.原位雜交技術(shù)

D.PCR 技術(shù)

【可能存在的問(wèn)題及解決方法】

1. 由于血液粘度

、細(xì)胞密度等差異可能造成的問(wèn)題及解決方案如下表所示：

出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因	建議解決方案

離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層	轉(zhuǎn)速過(guò)小或離心時(shí)間過(guò)短	適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)
離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)

離心后白環(huán)層彌散	細(xì)胞密度過(guò)大	調(diào)整細(xì)胞密度

離心后白環(huán)層太淺或看不見(jiàn)	細(xì)胞密度過(guò)小
離心后白環(huán)層太淺或看不見(jiàn)	細(xì)胞密度過(guò)小

本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度
、大氣壓等密切相關(guān)
。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)
，恒定離心時(shí)間
，對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。

本分離液依照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)
，全部使用藥用級(jí)原料
，性能指標(biāo)與國(guó)產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況
，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速
。

注：在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)

，直至達(dá)到最佳分離效果

，

離心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g

。離心時(shí)間以 20-30min 為準(zhǔn)

。

技術(shù)支持：庫(kù)價(jià)化學(xué)(KuuJia)

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別名	貓外周血白細(xì)胞分離液試劑盒（分子生物學(xué)及細(xì)胞培養(yǎng)專用）
英文名