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中文名稱：甲魚外周血白細胞分離液試劑盒（分子生物學(xué)及細胞培養(yǎng)專用）
中文別名：甲魚外周血白細胞分離液試劑盒（分子生物學(xué)及細胞培養(yǎng)專用）

產(chǎn)品類別：外周血白細胞的分離

產(chǎn)品編號：WBC1080T

產(chǎn)品名稱：甲魚外周血白細胞分離液試劑盒（分子生物學(xué)及細胞培養(yǎng)專用）

產(chǎn)品規(guī)格：200ml/KIT

產(chǎn)品價格：￥1050.00元

本品用于分離甲魚外周血白細胞

“XXXX”動物外周血白細胞分離液實驗方法

（細胞培養(yǎng)及分子生物學(xué)專用）

技術(shù)文檔編號：TBD0031SOP

【產(chǎn)品規(guī)格】

200ml/Kit

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：

	名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格

A	XXXX 動物外周血白細胞分離液		200ml

B	樣本稀釋液（贈品）	2010C1119	200ml

C	清洗液（贈品）	2010X1118	200ml

D	紅細胞裂解液（贈品）	NH4CL2009	100ml
E	說明書		1 份

【實驗前準備】

適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機

【檢驗方法】

全過程樣本

、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行

。

首先取抗凝血

，根據(jù)樣本量大小

，分以下兩種情況：

情況 A：血液樣本量小于 5ml 時
，實驗方法如下：

取一支 15ml 離心管
，先加入 5ml 分離液

用吸管小心吸取血液樣本加于分離液液面上
，500-800g
，離心 20-30min（注：如改變血液樣本及分離液用量
，需相應(yīng)調(diào)整離心力及離心時間
，具體離心條件需客戶自行摸索
，以達到最佳分離效果。）

離心后用吸管小心吸取所有環(huán)狀乳白色細胞層（一層或兩層）
，加入 10 ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細胞
。250g
，離心 10min
。重復(fù)洗滌 2-3 次
，即得所需白細胞
。

如有紅細胞殘留請使用紅細胞裂解液（產(chǎn)品編號：NH4CL2009）裂解紅細胞
，具體操

作方法詳見“紅細胞裂解液使用說明”

。

情況 B：血液樣本量大于等于 5ml 時
，實驗方法如下：

取一支適當?shù)碾x心管
，先加入與樣本等量的分離液
。

將血液樣本小心加于分離液之液面上，550-850g（最大離心力可至 1000g）
，離心20-30min
。（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液量越多
，離心力越大，離心時間越長
，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到最佳分離效果
。加入血液樣本后
，樣本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二）
。

剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 與步驟 4
。

【注意事項】

全過程樣本
、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結(jié)果
，最好在取血 2h 內(nèi)進行實驗
，血液存放時間越長
，細胞分離效果越差
。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的
。

本實驗最好不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品
，應(yīng)使用無靜電
、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品
，因為靜電作用將導(dǎo)致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面
，影響細胞分離效果。

分離液用量大于稀釋后血液樣本時
，分離效果更佳
。

當血液樣本粘度過高需稀釋時，最優(yōu)稀釋方法：將血液與樣本稀釋液（產(chǎn)品編號：2010C1119）1:1 稀釋混勻備用
。注：不當?shù)南♂尫椒〞档图毎寐始盎钚?div id="d48novz" class="flower left">

。如血液樣本?jīng)過稀釋則分離過程中需適當降低離心力和離心時間。

如實驗后細胞得率或活性過低
，請聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助
。

【儲存條件及有效期】

常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細菌

，需無菌條件操作

。無菌條件下操作，啟

封后置常溫保存

。如 4℃保存

，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果

。

【參考值（參考范圍）】

本實驗白細胞提取率及純度大于 80%

。

下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例，用戶可適當進行參考

。

	紅細胞		白細胞		血小板

		（4.0-10.0）×10⁹
含量（個/L）	（4.0-5.5）×10¹²	中性粒細胞	淋巴細胞	單核細胞	（1.0-3.0）×10¹¹
		50%-70%	20%-40%	3%-8%

【相關(guān)實驗技術(shù)方案】

所獲得白細胞的培養(yǎng)技術(shù)。

所獲得白細胞的核酸提取技術(shù)
。

所獲得白細胞的鑒定方法A.流式細胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)

C.原位雜交技術(shù)

D.PCR 技術(shù)

【可能存在的問題及解決方法】

1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：

出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因	建議解決方案

離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層	轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短	適當增減轉(zhuǎn)速

離心后目的細胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長
離心后目的細胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長

離心后白環(huán)層彌散	細胞密度過大	調(diào)整細胞密度

離心后白環(huán)層太淺或看不見	細胞密度過小
離心后白環(huán)層太淺或看不見	細胞密度過小

本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心
，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)
。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當?shù)厍闆r對離心條件進行適當調(diào)整。建議對離心條件進行調(diào)整時
，恒定離心時間
，對離心轉(zhuǎn)速進行調(diào)整
。

本分離液依照國際標準
，全部使用藥用級原料
，性能指標與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同
，可能出現(xiàn)紅細胞沉降不完全的情況，可以適當加大離心轉(zhuǎn)速
。

注：在對離心條件進行調(diào)整時，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)

，直至達到最佳分離效果

，

離心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g

。離心時間以 20-30min 為準

。

技術(shù)支持：庫價化學(xué)(KuuJia)

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別名	甲魚外周血白細胞分離液試劑盒（分子生物學(xué)及細胞培養(yǎng)專用）
英文名