產品類別：組織NK細胞的分離
 
產品編號：NK2011BP
 
產品名稱：牛臟器組織NK細胞分離液試劑盒
 
產品規(guī)格：2X200ml/Kit
 
產品價格：￥900.00元

本品用于分離牛臟器組織NK細胞


“XXXX”動物臟器組織 NK 細胞分離液實驗方法
 
 
 
技術文檔編號：TBD0039SOP
 
【產品規(guī)格】
 
2×200ml/Kit
 
【產品組成】
 
為方便廣大用戶使用，試劑內容如下：
 

	名稱	產品編號	規(guī)格
A	分離液 1		200ml
B	分離液 2		200ml
C	試劑 F（贈品）	F2013TBD	200ml
D	樣本稀釋液（贈品）	2010C1119	200ml
E	清洗液（贈品）	2010X1118	200ml
G	說明書		1 份

 
【實驗前準備】
 
適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。
 

• 首先制備臟器組織單細胞懸液
  ，制備方法詳見“組織單細胞懸液制備技術（文檔編號：

 
TBD0004SOP）”。
 

• 取一支離心管
  ，依次小心加入分離液 1
  、分離液 2（體積比為 3:1，試劑總量與細胞懸液體積比為 2：1
  。如細胞懸液為 2ml，則先后加入分離液 1：3ml

  、分離液 2：1ml。試劑總量最少不低于 4ml

  。）

  ，制成梯度界面

  ，各液面分層一定要清晰

  。

 

• 用吸管小心吸取細胞懸液加于分離液液面上
  ，400-500g，離心 20-30min（注：根據(jù)樣本量確定離心條件

  ，血液樣本量越多

  ，離心力越大

  ，離心時間越長

  ，具體離心條件需客戶自行摸索

  ，以達到最佳分離效果）。

 

• 離心后
  ，此時離心管中由上至下分為六層。第一層為稀釋液層

  。第二層為環(huán)狀乳白色 NK 細胞層（第一層白環(huán)及上層 50%分離液 2）

  。第三層為環(huán)狀乳白色單個核細胞層（下層 50%分離液 2 及第二層白環(huán)）

  。第四層為透明分離液 1 液層

  。第五層為粒細胞層。第六層為紅細胞層

  。

 

• 用吸管小心吸取第二層到另一 15ml 離心管中
  ，往所得離心管中加入 10ml 清洗液（產品編號：2010X1118），混勻細胞
  。

 

• 250g，離心 10min
  。

 

• 棄上清。

 

• 用吸管以 5-10ml 清洗液（產品編號：2010X1118）重懸所得細胞
  。

 

• 250g，離心 10min
  。

 

• 重復 7、8
  、9，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應液體重懸細胞

  。

 
分離圖例：

 
 
 
【差異貼壁法純化細胞】
 
（1）用 NK 細胞無血清培養(yǎng)基（產品編號：CNK2015）或 NK 細胞完全培養(yǎng)基（產品
 
編號：HCNK2015）以 1.5-3×10⁶ 個/ml 的密度重懸細胞，將細胞鋪于一次性細胞板或細
 
胞瓶中