、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
 
方法一（需留取血漿備用）
 

• 首先取抗凝血 250g 離心 10min
  ，棄血漿
  ，補(bǔ)加胎牛血清（添加量與棄去血漿量等同）制成細(xì)胞懸液
  ，根據(jù)細(xì)胞懸液液體體積，選擇適當(dāng)離心管進(jìn)行試驗(yàn)
  。

 

• 取一支離心管
  ，依次小心加入分離液 1、分離液 2（體積比為 3:1
  ，試劑總量與細(xì)胞懸液體積比為 2：1
  。如細(xì)胞懸液為 2ml
  ，則先后加入分離液 1：3ml
  、分離液 2：1ml。試劑總量最少不低于 4ml
  。）
  ，制成梯度界面，各液面分層一定要清晰
  。

 

• 用吸管小心吸取細(xì)胞懸液加于分離液液面上
  ，400-500g，離心 20-30min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件
  ，血液樣本量越多
  ，離心力越大，離心時(shí)間越長(zhǎng)
  ，具體離心條件需客戶(hù)自行摸索
  ，以達(dá)到最佳分離效果）。

 

• 離心后
  ，此時(shí)離心管中由上至下分為六層
  。第一層為稀釋液層。第二層為環(huán)狀乳白色單核細(xì)胞層（第一層白環(huán)及上層 50%分離液 2）
  。第三層為環(huán)狀乳白色單個(gè)核細(xì)胞層（下層50%分離液 2 及第二層白環(huán)）
  。第四層為透明分離液 1 液層。第五層為粒細(xì)胞層
  。第六層為紅細(xì)胞層
  。

 

• 用吸管小心吸取第二層到另一 15ml 離心管中，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品

編號(hào)：2010X1118），混勻細(xì)胞。
 

• 250g，離心 10min
  。

 

• 棄上清
  。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118）重懸所得細(xì)胞。

 

• 250g
  ，離心 10min
  。

 

• 重復(fù) 6
  、7、8
  ，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞
  。分離圖例

 
 
 
方法二（不需血漿留存?zhèn)溆茫?br />  

• 根據(jù)新鮮抗凝全血樣本量選取一支離心管，依次小心加入分離液 1
  、分離液 2（體積比為 3:1
  ，試劑總量與抗凝血體積比為 2：1。如抗凝血為 2ml
  ，則先后加入分離液 1：3ml
  、分離液 2：1ml。試劑總量最低不低于 4ml
  。）
  ，制成梯度界面，各液面分層一定要清晰
  。
• 用吸管小心吸取抗凝血加于分離液液面上
  ，400-500g，離心 20-30min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件
  ，血液樣本量越多
  ，離心力越大，離心時(shí)間越長(zhǎng)
  ，具體離心條件需客戶(hù)自行摸索
  ，以達(dá)到最佳分離效果）。

 

• 離心后
  ，此時(shí)離心管中由上至下分為六層
  。第一層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色單核細(xì)胞層（第一層白環(huán)及上層 50%分離液 2）
  。第三層為環(huán)狀乳白色單個(gè)核細(xì)胞層（下層50%分離液 2 及第二層白環(huán)）
  。第四層為透明分離液 1 液層。第五層為粒細(xì)胞層
  。第六層為紅細(xì)胞層
  。

 

• 后續(xù)步驟同方法一。

 
【差異貼壁法純化細(xì)胞】
 
（1）用單核細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基（產(chǎn)品編號(hào)：CTBD2011）或單核細(xì)胞完全培養(yǎng)基（產(chǎn)品
 
編號(hào)：HCTBD2011）以 1.5-3×10⁶ 個(gè)/ml 的密度重懸細(xì)胞