、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
 

• 首先制備骨髓單細(xì)胞懸液
  ，制備方法詳見“骨髓沖洗單細(xì)胞懸液制備技術(shù)（文檔編號(hào)：

 
TBD0004SOP）”。
 

• 取一支離心管
  ，依次小心加入分離液 1

  、分離液 2（體積比為 3:1

  ，試劑總量與細(xì)胞懸液體積比為 2：1

  。如細(xì)胞懸液為 2ml

  ，則先后加入分離液 1：3ml

  、分離液 2：1ml。試劑總量最少不低于 4ml

  。），制成梯度界面

  ，各液面分層一定要清晰

  。

 

• 用吸管小心吸取細(xì)胞懸液加于分離液液面上
  ，400-500g
  ，離心 20-30min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件
  ，血液樣本量越多
  ，離心力越大
  ，離心時(shí)間越長(zhǎng)，具體離心條件需客戶自行摸索
  ，以達(dá)到最佳分離效果）。

 

• 離心后，此時(shí)離心管中由上至下分為六層
  。第一層為稀釋液層
  。第二層為環(huán)狀乳白色單核細(xì)胞層（第一層白環(huán)及上層 50%分離液 2）
  。第三層為環(huán)狀乳白色單個(gè)核細(xì)胞層（下層50%分離液 2 及第二層白環(huán)）
  。第四層為透明分離液 1 液層

  。第五層為粒細(xì)胞層。第六層為紅細(xì)胞層

  。

 

• 用吸管小心吸取第二層到另一 15ml 離心管中，往所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118）
  ，混勻細(xì)胞
  。

 

• 250g
  ，離心 10min
  。

 

• 棄上清
  。

 

• 用吸管以 5-10ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118）重懸所得細(xì)胞
  。

 

• 250g，離心 10min
  。

 

• 重復(fù) 7、8
  、9
  ，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞
  。

 
分離圖例
 
 
 
【差異貼壁法純化細(xì)胞】
 
（1）用單核細(xì)胞無血清培養(yǎng)基（產(chǎn)品編號(hào)：CTBD2011）或單核細(xì)胞完全培養(yǎng)基（產(chǎn)品
 
編號(hào)：HCTBD2011）以 1.5-3×10⁶ 個(gè)/ml 的密度重懸細(xì)胞，將細(xì)胞鋪于一次性細(xì)胞板或
 
細(xì)胞瓶中，放于 37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。
 
（2）2-4 小時(shí)內(nèi)貼壁的為巨噬細(xì)胞前體（俗稱為單核細(xì)胞）。
 
（3）10-24 小時(shí)內(nèi)貼壁的單個(gè)核細(xì)胞為內(nèi)皮