“XXXX”動(dòng)物組織單個(gè)核細(xì)胞分離液實(shí)驗(yàn)方法
 
技術(shù)文檔編號(hào)：TBD0022SOP
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶(hù)使用，試劑內(nèi)容如下：
 

	名稱(chēng)	產(chǎn)品編號(hào)	規(guī)格
A	XXXX 動(dòng)物組織單個(gè)核細(xì)胞分離液		200ml
B	樣本稀釋液（贈(zèng)品）	2010C1119	200ml
C	清洗液（贈(zèng)品）	2010X1118	200ml
D	F 液（贈(zèng)品）	F2013TBD	200ml
E	說(shuō)明書(shū)		1 份

 
【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
 
適用儀器：最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
 
【檢驗(yàn)方法】
 
全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
 

• 首先制備組織單細(xì)胞懸液
  ，制備方法詳見(jiàn)“組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)”。

 

• 取一支 15ml 離心管
  ，加入與組織單細(xì)胞懸液等量的分離液（注：分離液最少不得少于

 
3ml）    

	紅細(xì)胞		白細(xì)胞			血小板
		（4.0-10.0）×109
含量（個(gè)/L）	（4.0-5.5）×1012	中性粒細(xì)胞	淋巴細(xì)胞		單核細(xì)胞	（1.0-3.0）×1011
		50%-70%	20%-40%		3%-8%

 
【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】
 

• 組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)

 

• 所獲得單個(gè)核細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)
  。

 

• 所獲得單個(gè)核細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。

 

• 所獲得單個(gè)核細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù)

 
D.PCR 技術(shù)
 
 
【可能存在的問(wèn)題及解決方法】
 
1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問(wèn)題及解決方案如下表所示：
 

出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因	建議解決方案
離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層	轉(zhuǎn)速過(guò)小或離心時(shí)間過(guò)短	適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速
離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)
離心后白環(huán)層彌散	細(xì)胞密度過(guò)大	調(diào)整細(xì)胞密度
離心后白環(huán)層太淺或看不見(jiàn)	細(xì)胞密度過(guò)小

 

• 本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度
  、大氣壓等密切相關(guān)

  。不同地區(qū)客戶(hù)可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)

  ，恒定離心時(shí)間，對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整

  。

 

• 本分離液依照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)
  ，全部使用藥用級(jí)原料，性能指標(biāo)與國(guó)產(chǎn)同類(lèi)產(chǎn)品略有不同

  ，可

 
能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速