“XXXX”動物外周血單個核細(xì)胞分離液實驗方法
 
技術(shù)文檔編號：TBD0021SOP
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
 

	名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格
A	XXXX 動物外周血單個核細(xì)胞分離液		200ml
B	樣本稀釋液（贈品）	2010C1119	200ml
C	清洗液（贈品）	2010X1118	200ml
D	說明書		1 份

 
【實驗前準(zhǔn)備】
 
適用儀器：最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
 
首先取抗凝血按體積比 1:1 的比例加入樣本稀釋液（產(chǎn)品編號：2010C1119）混勻，根
 
據(jù)稀釋后的樣本量大小，分以下兩種情況：
 
情況 A：稀釋后的血液樣本量小于 5ml 時，實驗方法如下：
 

• 取一支 15ml 離心管
  ，先加入與稀釋后樣本等量的分離液（注：分離液最少不得少于 3ml）
  。

 

• 用吸管小心吸取稀釋后的血液樣本加于分離液液面上，400-500g 
  ，離心 20-30min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件
  ，血液樣本量越多，離心力越大
  ，離心時間越長
  ，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果）
  。

 

• 離心后
  ，此時離心管中由上至下分為四層。第一層為血漿層
  。第二層為環(huán)狀乳白色單個核細(xì)胞層
  。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層

  。

 

• 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個核細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中
  ，在離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細(xì)胞
  。
• 250g
  ，離心 10min。

 

• 棄上清
  。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細(xì)胞
  。

• 250g，離心 10min
  。

 

• 重復(fù) 6
  、7、8
  ，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞
  。

 
情況 B：稀釋后的血液樣本量大于等于 5ml 時，實驗方法如下：
 

• 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管
  ，先加入與稀釋后樣本等量的分離液
  。

 

• 將經(jīng)稀釋后的血液樣本小心加于分離液之液面上，500-650g（最大離心力可至 1000g）
  ，離心 20-30min
  。（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件
  ，血液量越多，離心力越大
  ，離心時間越長
  ，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果
  。加入血液樣本后
  ，樣本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二）。

 

• 剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 至步驟 9
  。

 
 
 
 
 
【注意事項】
 

• 全過程樣本
  、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得最佳的實驗結(jié)果
  ，最好在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實驗
  ，血液存放時間越長，細(xì)胞分離效果越差
  。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的

  。

 

• 本實驗最好不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電
  、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品

  ，因為靜電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面

  ，影響細(xì)胞分離效果

  。

 

• 吸取過多的單個核細(xì)胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加。

 

• 吸取過多的單個核細(xì)胞層上層溶液會導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜
  。

 

• 分離液用量大于稀釋后血液樣本時
  ，分離效果更佳。

 

• 如實驗后細(xì)胞得率或活性過低
  ，請聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助.

 
【儲存條件及有效期】
 
常溫保存