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中文名稱：人全血單個核細(xì)胞分離液醫(yī)用級（細(xì)胞培養(yǎng)處理試劑盒試劑1）
中文別名：人全血單個核細(xì)胞分離液醫(yī)用級（細(xì)胞培養(yǎng)處理試劑盒試劑1）

產(chǎn)品類別：外周血單個核細(xì)胞的分離

產(chǎn)品編號：LDS10750125

產(chǎn)品名稱：人全血單個核細(xì)胞分離液醫(yī)用級（細(xì)胞培養(yǎng)處理試劑盒試劑1）

產(chǎn)品規(guī)格：200ml/瓶

產(chǎn)品價格：￥3600.00元

用于分離人全血單個核細(xì)胞分離液醫(yī)用級

樣本密度分離液（人全血單個核細(xì)胞分離液）說明書

【包裝規(guī)格】

200ml/瓶

【實驗前準(zhǔn)備】

適用儀器：最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)

【檢驗方法】

全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行

。

首先根據(jù)樣本量大小

，分以下幾種情況：

一、使用 15ml 離心管時：

情況 A：血液樣本量小于 3ml 時

，實驗方法如下：

取一支 15ml 離心管
，加入 3ml 分離液。

用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上
，400-650g
，離心 20-30min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液樣本量越多
，離心力越大
，離心時間越長
，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果）
。

離心后
，此時離心管中由上至下分為四層。第一層為血漿層
。第二層為環(huán)狀乳白色單個核細(xì)胞層
。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層
。

用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個核細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中
，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細(xì)胞
。

250g
，離心 10min。

棄上清
。

用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細(xì)胞
。

250g，離心 10min
。

重復(fù) 6
、7、8
，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞
。

情況 B：血液樣本量為 3-6ml 時，實驗方法如下：

取一支 15ml 離心管
，先加入與血液樣本等量的分離液
。

用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上，400-650g
，離心 20-30min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件
，血液樣本量越多，離心力越大
，離心時間越長
，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果
，但最大離心力最好不超過 1000g）
。

離心后，此時離心管中由上至下分為四層
。第一層為血漿層
。第二層為環(huán)狀乳白色單個

核細(xì)胞層。第三層為透明分離液層

。第四層為紅細(xì)胞層。

用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個核細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）
，混勻細(xì)胞
。

250g，離心 10min
。

棄上清
。

用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細(xì)胞。

250g
，離心 10min
。

重復(fù) 6、7
、8
，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。

二
、使用 50ml 離心管時：

情況 A：血液樣本量為 6-10ml 時
，實驗方法如下：

取一支 50ml 離心管，先加入與血液樣本等量的分離液
。

用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上
，500-950g，離心 20-30min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件
，血液樣本量越多
，離心力越大，離心時間越長
，具體離心條件需客戶自行摸索
，以達(dá)到最佳分離效果，但最大離心力最好不超過 1200g）
。

離心后
，此時離心管中由上至下分為四層。第一層為血漿層
。第二層為環(huán)狀乳白色單個核細(xì)胞層
。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層
。

用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個核細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中
，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細(xì)胞
。

250g
，離心 10min。

棄上清
。

用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細(xì)胞
。

250g
，離心 10min。

重復(fù) 6
、7
、8，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞
。

情況 B：血液樣本量為 10-20ml 時
，實驗方法如下：

取一支 50ml 離心管，先加入與血液樣本等量的分離液
。

用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上
，650-110g，離心 20-30min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件
，血液樣本量越多
，離心力越大，離心時間越長
，具體離心條件需客戶自行摸索
，以達(dá)到最佳分離效果，但最大離心力最好不超過 1200g）
。

離心后
，此時離心管中由上至下分為四層。第一層為血漿層
。第二層為環(huán)狀乳白色單個

核細(xì)胞層

。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層

。

用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個核細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中
，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細(xì)胞
。

250g
，離心 10min。

棄上清
。

用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細(xì)胞
。

250g，離心 10min
。

重復(fù) 6
、7、8
，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞
。

分離圖例

【注意事項】

全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行
。為獲得最佳的實驗結(jié)果
，最好在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實驗
，血液存放時間越長，細(xì)胞分離效果越差
。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的
。

本實驗最好不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品
，應(yīng)使用無靜電
、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁
、堿處理的玻璃表面會變成毛面
，影響細(xì)胞分離效果。

吸取過多的單個核細(xì)胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加
。

吸取過多的單個核細(xì)胞層上層溶液會導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜
。

如所實驗后細(xì)胞得率或活性過低，請聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助
。

當(dāng)血液樣本粘度過高需稀釋時
，最優(yōu)稀釋方法：將血液與樣本稀釋液（產(chǎn)品編號：2010C1119）1:1 稀釋混勻備用。注：不當(dāng)?shù)南♂尫椒〞档图?xì)胞得率及活性
。如血液樣

本經(jīng)過稀釋則分離過程中需適當(dāng)降低離心力和離心時間

。

【儲存條件及有效期】

18-25℃保存，有效期 2 年

。本品易感染細(xì)菌

，需無菌條件操作。無菌條件下操作

，啟

封后置常溫保存

。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶

，影響分離效果

。

【參考值（參考范圍）】

本實驗淋巴細(xì)胞提取率及純度均大于 80%。

下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例

，用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考

。

	紅細(xì)胞		白細(xì)胞		血小板

		（4.0-10.0）×10⁹
	（4.0-5.5）×10¹²				（1.0-3.0）×10¹¹
含量（個/L）	（4.0-5.5）×10¹²	中性粒細(xì)胞	淋巴細(xì)胞	單核細(xì)胞	（1.0-3.0）×10¹¹

		50%-70%	20%-40%	3%-8%

【相關(guān)實驗技術(shù)方案】

所獲得淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。

所獲得淋巴細(xì)胞的核酸提取技術(shù)
。

所獲得淋巴細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù)

D.PCR 技術(shù)

【可能存在的問題及解決方法】

1. 由于血液粘度

、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：

出現(xiàn)情況

出現(xiàn)原因

建議解決方案

離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速


離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長

離心后白環(huán)層彌散	細(xì)胞密度過大	調(diào)整細(xì)胞密度

離心后白環(huán)層太淺或看不見	細(xì)胞密度過小
離心后白環(huán)層太淺或看不見	細(xì)胞密度過小

本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度
、大氣壓等密切相關(guān)
。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對離心條件進(jìn)行調(diào)整時
，恒定離心時間
，對離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整
。

本分離液依照國際標(biāo)準(zhǔn)，全部使用藥用級原料
，性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同
，可

能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速

。

注：在對離心條件進(jìn)行調(diào)整時

，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達(dá)到最佳分離效果

，離心力最小不得小于 400g

，最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準(zhǔn)

。

【說明書核準(zhǔn)及修改日期】2014 年 12 月 11 日

技術(shù)支持：庫價化學(xué)(KuuJia)

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別名	人全血單個核細(xì)胞分離液醫(yī)用級（細(xì)胞培養(yǎng)處理試劑盒試劑1）
英文名