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中文名稱：人骨髓單個(gè)核細(xì)胞分離液試劑盒
中文別名：人骨髓單個(gè)核細(xì)胞分離液試劑盒

人骨髓單個(gè)核細(xì)胞分離液實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品編號(hào)：TBD2013CHU 產(chǎn)品名稱：人骨髓單個(gè)核細(xì)胞分離液試劑盒技術(shù)文檔編號(hào)：TBD0024SOP 【產(chǎn)品規(guī)格】 200ml/Kit 【產(chǎn)品組成】為方便廣大用戶使用

，試劑內(nèi)容如下：名稱產(chǎn)品編號(hào) 規(guī)格 A XXXX 動(dòng)物骨髓單個(gè)核細(xì)胞分離液 200ml B 樣本稀釋液（贈(zèng)品） 2010C1119 200ml C 清洗液（贈(zèng)品） 2010X1118 200ml D F 液（贈(zèng)品） F2013TBD 200ml E 說(shuō)明書 1 份【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】適用儀器：最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī) 【檢驗(yàn)方法】全過(guò)程樣本

、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。 1.首先制備骨髓單細(xì)胞懸液

，制備方法詳見“骨髓沖洗單細(xì)胞懸液制備技術(shù)”

。 2.取一支 15ml 離心管，加入與骨髓單細(xì)胞懸液等量的分離液（注：分離液最少不得少于 3ml）

。 3.用吸管小心吸取骨髓單細(xì)胞懸液加于分離液液面上

，400-500g，離心 20-30min

。（注：根據(jù)骨髓單細(xì)胞懸液量確定離心條件

，骨髓單細(xì)胞懸液量越大，離心力越大

，離心時(shí)間越長(zhǎng)

，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果）

。 4.離心后

，此時(shí)離心管中由上至下分為四層。第一層為稀釋液層

。第二層為環(huán)狀乳白色單個(gè)核細(xì)胞層

。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層

。 5.用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個(gè)核細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中

，向離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118），混勻細(xì)胞

。 6.250g

，離心 10min。 7.棄上清

。 8.用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118）重懸所得細(xì)胞

。 9.250g，離心 10min

。 10.重復(fù) 7

、8、9

，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞

。分離圖例【注意事項(xiàng)】 1.全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行

。為獲得最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

，最好在取樣 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，樣品存放時(shí)間越長(zhǎng)

，細(xì)胞分離效果越差

。樣品放置超過(guò) 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。 2.本實(shí)驗(yàn)最好不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品

，應(yīng)使用無(wú)靜電

、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁

、堿處理的玻璃表面會(huì)變成毛面

，影響細(xì)胞分離效果。 3.吸取過(guò)多的單個(gè)核細(xì)胞層及分離液層會(huì)導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加

。 4.分離液用量大于骨髓單細(xì)胞懸液樣本時(shí)

，分離效果更佳。 5.如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過(guò)低

，請(qǐng)聯(lián)技術(shù)支持以尋求幫助. 【儲(chǔ)存條件及有效期】常溫保存

，有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌

，需無(wú)菌條件操作

。無(wú)菌條件下操作，啟封后置常溫保存

。如 4℃保存

，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果

。【參考值（參考范圍）】本實(shí)驗(yàn)單個(gè)核細(xì)胞提取率及純度大于 80%

。下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例，用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考

。紅細(xì)胞白細(xì)胞血小板（4.0-10.0）×109 含量（個(gè)/L）（4.0-5.5）×1012 中性粒細(xì)胞淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞（1.0-3.0）×1011 50%-70% 20%-40% 3%-8% 【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】 1.骨髓沖洗單細(xì)胞懸液制備技術(shù)

。 2.所獲得單個(gè)核細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。 3.所獲得單個(gè)核細(xì)胞的核酸提取技術(shù)

。 4.所獲得單個(gè)核細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù) D.PCR 技術(shù) 【可能存在的問(wèn)題及解決方法】 1. 由于血液粘度

、細(xì)胞密度等差異可能造成的問(wèn)題及解決方案如下表所示：出現(xiàn)情況出現(xiàn)原因建議解決方案離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層轉(zhuǎn)速過(guò)小或離心時(shí)間過(guò)短適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速離心后目的細(xì)胞存在于分離液中轉(zhuǎn)速過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng) 離心后白環(huán)層彌散細(xì)胞密度過(guò)大調(diào)整細(xì)胞密度離心后白環(huán)層太淺或看不見細(xì)胞密度過(guò)小 2.本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度

、大氣壓等密切相關(guān)

。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)

，恒定離心時(shí)間

，對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。 3.本分離液依照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)

，全部使用藥用級(jí)原料

，性能指標(biāo)與國(guó)產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況

，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速

。注：在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)

，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達(dá)到最佳分離效果

，離心力最小不得小于 400g

，最大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min 為準(zhǔn)

。