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中文名稱：大鼠脾臟淋巴細胞分離液試劑盒
中文別名：大鼠脾臟淋巴細胞分離液試劑盒

產(chǎn)品類別：脾臟淋巴細胞的分離

產(chǎn)品編號：LTS1083PK

產(chǎn)品名稱：大鼠脾臟淋巴細胞分離液試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：200ml/KIT

產(chǎn)品價格：￥550元

本品用于分離大鼠脾臟淋巴細胞

“XXXX”動物脾臟組織淋巴細胞分離液實驗方法

技術(shù)文檔編號：TBD0019SOP

【產(chǎn)品規(guī)格】

200ml/Kit

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶使用

，試劑內(nèi)容如下：

	名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格

A	XXXX 動物脾臟組織淋巴細胞分離液		200ml

B	樣本稀釋液（贈品）	2010C1119	200ml

C	清洗液（贈品）	2010X1118	200ml

D	F 液（贈品）	F2013TBD	200ml
E	說明書		1 份

【實驗前準備】

適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機

【檢驗方法】

全過程樣本

、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。

首先制備脾臟組織單細胞懸液
，制備方法詳見“脾臟組織單細胞懸液制備技術(shù)”
。

取一支 15ml 離心管，加入與脾臟組織單細胞懸液等量的分離液（注：分離液最少不得少于 3ml）。
用吸管小心吸取脾臟組織單細胞懸液加于分離液液面上
，400-500g
，離心 20-30min。（注：根據(jù)脾臟組織單細胞懸液量確定離心條件
，脾臟組織單細胞懸液量越大
，離心力越大，離心時間越長
，具體離心條件需客戶自行摸索
，以達到最佳分離效果）。

離心后
，此時離心管中由上至下分為四層
。第一層為稀釋液層。第二層為環(huán)狀乳白色淋巴細胞層
。第三層為透明分離液層
。第四層為紅細胞層。

用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細胞層到另一 15ml 離心管中
，向離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）
，混勻細胞。
250g
，離心 10min
。

棄上清。

用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細胞
。

250g
，離心 10min。

重復(fù) 7
、8
、9，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細胞
。

分離圖例：

【注意事項】

全過程樣本
、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結(jié)果
，最好在取樣 2h 內(nèi)進行實驗
，樣品存放時間越長，細胞分離效果越差
。樣品放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的
。

本實驗最好不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電
、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品
，因為靜電作用將導(dǎo)致細胞貼壁
、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細胞分離效果
。

吸取過多的淋巴細胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒細胞數(shù)量增加
。

分離液用量大于脾臟組織單細胞懸液樣本時，分離效果更佳
。

如實驗后細胞得率或活性過低
，請聯(lián)系研謹生物技術(shù)以尋求幫助。

【儲存條件及有效期】

常溫保存

，有效期 2 年

。本品易感染細菌，需無菌條件操作

。無菌條件下操作

，啟封后置常溫保存。如 4℃保存

，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶

，影響分離效果。
【參考值（參考范圍）】

本實驗淋巴細胞提取率及純度均大于 80%

。

下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例

，用戶可適當進行參考。


	紅細胞		白細胞		血小板

		（4.0-10.0）×10⁹
含量（個/L）	（4.0-5.5）×10¹²	中性粒細胞	淋巴細胞	單核細胞	（1.0-3.0）×10¹¹
		50%-70%	20%-40%	3%-8%

【相關(guān)實驗技術(shù)方案】

脾臟組織單細胞懸液制備技術(shù)
。

所獲得淋巴細胞的培養(yǎng)技術(shù)
。

所獲得淋巴細胞的核酸提取技術(shù)。

所獲得淋巴細胞的鑒定方法A.流式細胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù)D.PCR 技術(shù)

【可能存在的問題及解決方法】

1. 由于血液粘度

、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：

出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因	建議解決方案

離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層	轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短	適當增減轉(zhuǎn)速

離心后目的細胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長
離心后目的細胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長

離心后白環(huán)層彌散	細胞密度過大	調(diào)整細胞密度

離心后白環(huán)層太淺或看不見	細胞密度過小
離心后白環(huán)層太淺或看不見	細胞密度過小