雞臟器組織淋巴細(xì)胞分離液實(shí)驗(yàn)方法
 
本品用于分離雞臟器組織淋巴細(xì)胞
 
技術(shù)文檔編號(hào)：TBD0018SOP
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
 

	名稱	產(chǎn)品編號(hào)	規(guī)格
A	XXXX 動(dòng)物組織淋巴細(xì)胞分離液		200ml
B	樣本稀釋液（贈(zèng)品）	2010C1119	200ml
C	清洗液（贈(zèng)品）	2010X1118	200ml
D	F 液（贈(zèng)品）	F2013TBD	200ml
E	說明書		1 份

 
【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
 
適用儀器：最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
 
【檢驗(yàn)方法】
 
全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
 

• 首先制備組織單細(xì)胞懸液
  ，制備方法詳見“組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)”
  。

 

• 取一支 15ml 離心管，加入與組織單細(xì)胞懸液等量的分離液（注：分離液最少不得少于

 
3ml）。
 

• 用吸管小心吸取組織單細(xì)胞懸液加于分離液液面上
  ，400-500g，離心 20-30min
  。（注：根據(jù)組織單細(xì)胞懸液量確定離心條件
  ，組織單細(xì)胞懸液量越大，離心力越大
  ，離心時(shí)間越長
  ，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果）。

 

• 離心后
  ，此時(shí)離心管中由上至下分為四層
  。第一層為稀釋液層。第二層為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層
  。第三層為透明分離液層
  。第四層為紅細(xì)胞層。

 

• 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中
  ，向離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118）
  ，混勻細(xì)胞。
• 250g
  ，離心 10min
  。

 

• 棄上清。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118）重懸所得細(xì)胞
  。

 
 

• 250g
  ，離心 10min。

 

• 重復(fù) 7
  、8

  、9，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞

  。

 
分離圖例
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
【注意事項(xiàng)】
 

• 全過程樣本
  、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

  ，最好在取樣 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)

  ，樣品存放時(shí)間越長，細(xì)胞分離效果越差

  。樣品放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的

  。

 

• 本實(shí)驗(yàn)最好不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電
  、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品

  ，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會(huì)變成毛面

  ，影響細(xì)胞分離效果

  。

 

• 吸取過多的淋巴細(xì)胞層及分離液層會(huì)導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加。

 

• 分離液用量大于組織單細(xì)胞懸液樣本時(shí)
  ，分離效果更佳
  。

 

• 如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過低，請(qǐng)聯(lián)系研謹(jǐn)生物技術(shù)以尋求幫助
  。

 
【儲(chǔ)存條件及有效期】
 
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
【參考值（參考范圍）】
 
本實(shí)驗(yàn)淋巴細(xì)胞提取率及純度大于 80%。
 
下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例，用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。