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中文名稱：小鼠外周血淋巴細(xì)胞分離液KIT
中文別名：小鼠外周血淋巴細(xì)胞分離液KIT

小鼠外周血淋巴細(xì)胞分離液實(shí)驗(yàn)方法

本品用于分離小鼠外周血淋巴細(xì)胞

技術(shù)文檔編號：TBD0017SOP

【產(chǎn)品規(guī)格】

200ml/Kit

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶使用

，試劑內(nèi)容如下：

【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】

適用儀器：最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)

【檢驗(yàn)方法】

全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行

。

首先取抗凝血按體積比 1:1 的比例與樣本稀釋液（產(chǎn)品編號：2010C1119）混勻

，根據(jù)

稀釋后的樣本量大小

，分以下兩種情況：

情況 A：稀釋后的血液樣本量小于 5ml 時(shí)，實(shí)驗(yàn)方法如下：

離心后
，此時(shí)離心管中由上至下分為四層。第一層為血漿層
。第二層為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層
。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層
。

用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中
，往所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細(xì)胞
。
250g
，離心 10min。

情況 B：稀釋后的血液樣本量大于等于 5ml 時(shí)，實(shí)驗(yàn)方法如下：

分離圖例

【注意事項(xiàng)】

本實(shí)驗(yàn)最好不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電
、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品
，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面
，影響細(xì)胞分離效果
。

【儲存條件及有效期】

常溫保存

，有效期 2 年

。本品易感染細(xì)菌，需無菌條件操作

。無菌條件下操作

，啟

封后置常溫保存

。如 4℃保存

，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果

。

【參考值（參考范圍）】

本實(shí)驗(yàn)淋巴細(xì)胞提取率及純度均大于 80%

。

下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例，用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考

。

C.原位雜交技術(shù)

D.PCR 技術(shù)

【可能存在的問題及解決方法】
1.	由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：

	出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因	建議解決方案

離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層		轉(zhuǎn)速過小或離心時(shí)間過短	適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

	離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時(shí)間過長
	離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時(shí)間過長

	離心后白環(huán)層彌散	細(xì)胞密度過大	調(diào)整細(xì)胞密度

	離心后白環(huán)層太淺或看不見	細(xì)胞密度過小
	離心后白環(huán)層太淺或看不見	細(xì)胞密度過小

2.	本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地