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中文名稱：人外周血淋巴細(xì)胞分離液內(nèi)毒素<0.5EU科研級
中文別名：人外周血淋巴細(xì)胞分離液內(nèi)毒素<0.5EU科研級

人外周血淋巴細(xì)胞分離液說明書

本品用于分離人外周血淋巴細(xì)胞

，內(nèi)毒素<0.5EU 科研級

【包裝規(guī)格】

200ml/瓶

【貨號】

LTS1077

【適用儀器】

最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機

【檢驗方法】

全過程樣本

、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。

通用實驗方法

取 2ml 新鮮抗凝血與 2ml 樣本稀釋液（產(chǎn)品編號：2010C1119）混勻
。

取一支 15ml 離心管
，加入 3ml 分離液，用吸管小心吸取稀釋后的血液樣本加于分離液之液面上
，400g
，30-40min。

離心后
，此時離心管中由上至下分為四層
。第一層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層
。第三層為透明分離液層
。第四層為紅細(xì)胞層
。

取白環(huán)層，加入 3 倍體積的清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）混勻
，60-100g
，離心 10min，棄上清
。

加 6-8ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）混勻
，60-100g，離心 10min
，棄去上清
，后

以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸目的細(xì)胞。

注：血液樣品量增大時
，可通過改變離心管直徑的方法始終保持樣本量高度與分離液高度為

2.4cm 與 3cm
，其他分離條件不變。

為滿足客戶實際使用需求

，灝洋根據(jù)不同血液樣本量推薦具體實驗操作方法如下：

一
、使用 15ml 離心管時：

情況 A：血液樣本量小于 3ml 時，實驗方法如下：

取一支 15ml 離心管
，加入 3ml 分離液
。

用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上，400-650g
，離心 20-30min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件
，血液樣本量越多，離心力越大
，離心時間越長
，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果）
。

離心后
，此時離心管中由上至下分為四層。第一層為血漿層
。第二層為環(huán)狀乳白色淋巴

細(xì)胞層

。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層

。

用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中
，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細(xì)胞
。

250g
，離心 10min。

棄上清。

用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細(xì)胞
。

250g
，離心 10min。

重復(fù) 6
、7
、8，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞
。

情況 B：血液樣本量為 3-6ml 時
，實驗方法如下：

取一支 15ml 離心管
，先加入與血液樣本等量的分離液。

用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上
，450-650g
，離心 20-30min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件
，血液樣本量越多
，離心力越大
，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索
，以達(dá)到最佳分離效果
，但最大離心力最好不超過 1200g）。

離心后
，此時離心管中由上至下分為四層
。第一層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層
。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層
。

用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中
，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細(xì)胞
。

250g
，離心 10min。

棄上清
。

用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細(xì)胞
。

250g，離心 10min
。

重復(fù) 6
、7、8
，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞
。

二、使用 50ml 離心管時：

情況 A：血液樣本量為 6-10ml 時，實驗方法如下：

取一支 50ml 離心管
，先加入與血液樣本等量的分離液
。

用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上，500-950g
，離心 20-30min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件
，血液樣本量越多，離心力越大
，離心時間越長
，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果
，但最大離心力最好不超過 1200g）
。

離心后，此時離心管中由上至下分為四層
。第一層為血漿層
。第二層為環(huán)狀乳白色淋巴

細(xì)胞層。第三層為透明分離液層

。第四層為紅細(xì)胞層

。

用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）
，混勻細(xì)胞
。

250g，離心 10min
。

棄上清
。

用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細(xì)胞。

250g
，離心 10min
。

重復(fù) 6、7
、8
，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。

情況 B：血液樣本量為 10-20ml 時

，實驗方法如下：

取一支 50ml 離心管
，先加入與血液樣本等量的分離液。

用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上
，500-1100g
，離心 20-30min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液樣本量越多
，離心力越大
，離心時間越長
，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果
，但最大離心力最好不超過 1200g）
。

離心后，此時離心管中由上至下分為四層
。第一層為血漿層
。第二層為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層。第三層為透明分離液層
。第四層為紅細(xì)胞層
。

用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）
，混勻細(xì)胞
。

250g，離心 10min
。

棄上清
。

用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細(xì)胞。

250g
，離心 10min
。

重復(fù) 6、7
、8
，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。

【注意事項】

全過程樣本
、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行
。為獲得最佳的實驗結(jié)果，最好在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實驗
，血液存放時間越長
，細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的
。

本實驗最好不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電
、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品
，因為靜電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面
，影響細(xì)胞分離效果
。

吸取過多的淋巴細(xì)胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加。

吸取過多的淋巴細(xì)胞層上層溶液會導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜
。

如所實驗后細(xì)胞得率或活性過低
，請聯(lián)系研謹(jǐn)生物技術(shù)以尋求幫助
。

當(dāng)血液樣本粘度過高需稀釋時，最優(yōu)稀釋方法：將血液與樣本稀釋液（產(chǎn)品編號：2010C1119）1:1 稀釋混勻備用
。注：不當(dāng)?shù)南♂尫椒〞档图?xì)胞得率及活性
。如血液樣本經(jīng)過稀釋則分離過程中需適當(dāng)降低離心力和離心時間。

因血液樣本的個體差異及血液粘度不同
，需調(diào)整離心力及離心時間
，離心力最大不超過

1000g。

【儲存條件及有效期】

常溫保存

，有效期 2 年

。本品易感染細(xì)菌，需無菌條件操作

。無菌條件下操作

，啟

封后置常溫保存。如 4℃保存

，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶

，影響分離效果。

【參考值（參考范圍）】

本實驗淋巴細(xì)胞提取率及純度均大于 80%

。

下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例

，用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。

紅細(xì)胞

白細(xì)胞

血小板

（4.0-10.0）×10⁹

（4.0-5.5）×10¹²

（1.0-3.0）×10¹¹

含量（個/L）

中性粒細(xì)胞

淋巴細(xì)胞

單核細(xì)胞

50%-70%

20%-40%

3%-8%

【灝洋新型離心管最佳實驗技術(shù)方案】

抗凝血液

稀釋液

分離液

離心力

離心時間

15mL 離心管

3mL

約 4mL

（與隔片持平）

400-500g

4mL

（最大不超過

20-30min

10mL

約 15mL

50mL 離心管

1000g）

15mL

（與隔片持平）

【相關(guān)實驗技術(shù)方案】

所獲得淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)
。

所獲得淋巴細(xì)胞的核酸提取技術(shù)
。

所獲得淋巴細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù)

D.PCR 技術(shù)

【可能存在的問題及解決方法】

1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：

出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因	建議解決方案

離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層	轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短	適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長
離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長

離心后白環(huán)層彌散	細(xì)胞密度過大	調(diào)整細(xì)胞密度

離心后白環(huán)層太淺或看不見	細(xì)胞密度過小
離心后白環(huán)層太淺或看不見	細(xì)胞密度過小

本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心
，其密度與溫度
、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整
。建議對離心條件進(jìn)行調(diào)整時
，恒定離心時間，對離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整
。

本分離液依照國際標(biāo)準(zhǔn)
，全部使用藥用級原料，性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同
，可

能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況

，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。

注：在對離心條件進(jìn)行調(diào)整時

，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)

，直至達(dá)到最佳分離效果，離心力最小不得小于 400g

，最大不得大于 1200g

。離心時間以 20-30min 為準(zhǔn)

。

技術(shù)支持：庫價化學(xué)(KuuJia)

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