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中文名稱：豚鼠臟器組織中性粒細(xì)胞分離液試劑盒
中文別名：豚鼠臟器組織中性粒細(xì)胞分離液試劑盒

豚鼠臟器組織中性粒細(xì)胞分離液KIT說明書

本品用于分離豚鼠臟器組織中性粒細(xì)胞

【產(chǎn)品規(guī)格】

200ml/Kit

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：

	名稱	產(chǎn)品編號(hào)	規(guī)格

A	分離液 1		200ml

B	樣本稀釋液	2010C1119	200ml

C	清洗液（贈(zèng)品）	2010X1118	200ml

D	紅細(xì)胞裂解液（贈(zèng)品）	NH4CL2009	100ml

E	紅細(xì)胞沉降液（6%羥乙基淀粉）	HES-TBD550-80	80ml

F	試劑 F	F2013TBD	200ml

G	說明書		1 份

【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】

適用儀器：最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)

【檢驗(yàn)方法】

全過程樣本

、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行

。

首先制備組織單細(xì)胞懸液，制備方法詳見“鼠組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)”
。

取一支 15ml 離心管
，先加入分離液 1：3ml，后加入 80%濃度分離液 1 溶液（分離液 1：

樣本稀釋液=4：1 的混合液）：1.5ml

，形成梯度界面

。

用吸管小心吸取細(xì)胞懸液樣本加于分離液之液面上
，650-800g
，離心 20-30min（注：如改變樣本及分離液用量，需相應(yīng)調(diào)整離心力及離心時(shí)間
，具體離心條件需客戶自行摸索
，以達(dá)到最佳分離效果）。

離心后
，稀釋液層下出現(xiàn)兩層白色環(huán)狀細(xì)胞層
，取下層白色環(huán)狀中性粒細(xì)胞層（會(huì)有少量紅細(xì)胞混雜）
，加 3-5 倍體積清洗液混勻，400g 離心 10min
。

離心后棄上清
，后可通過兩種方法去除紅細(xì)胞。

方法一：細(xì)胞沉淀用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞（具體方法參見“紅細(xì)胞裂解液說明書”）

。

方法二：

1. 細(xì)胞沉淀用 1ml 紅細(xì)胞沉降液重懸

，加于 3ml 分離液 1 之液面上，400g 離心 20min

。

取白色環(huán)狀細(xì)胞層
，加 3-5 倍體積清洗液混勻，250g 離心 10min
，重復(fù)洗滌 2-3 次
，獲得目的細(xì)胞（如仍有少量紅細(xì)胞混雜，使用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞）
。

分離圖例：

【注意事項(xiàng)】

全過程樣本
、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果
，需在取樣 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)
。

本實(shí)驗(yàn)最好不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電
、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品
，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會(huì)變成毛面
，影響細(xì)胞分離效果
。

分離液用量大于骨髓單細(xì)胞懸液樣本量時(shí)，分離效果更佳
。

如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過低
，請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助.

請(qǐng)勿使用具有紅細(xì)胞保護(hù)成分的抗凝劑，否則影響分離效果（離心后
，紅細(xì)胞不能完全沉至離心管底部）
。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

常溫保存，有效期 2 年

。本品易感染細(xì)菌

，需無菌條件操作。無菌條件下操作

，啟封后置常溫保存

。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶

，影響分離效果。

【參考值（參考范圍）】

本實(shí)驗(yàn)中性粒細(xì)胞提取率大于 80%

。

【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】

骨髓沖洗單細(xì)胞懸液制備技術(shù)
。

所獲得中性粒細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。

所獲得中性粒細(xì)胞的核酸提取技術(shù)
。

所獲得中性粒細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)

C.原位雜交技術(shù)

D.PCR 技術(shù)

【可能存在的問題及解決方法】

1. 由于血液粘度

、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：

出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因	建議解決方案

離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層	轉(zhuǎn)速過小或離心時(shí)間過短	適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時(shí)間過長(zhǎng)
離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時(shí)間過長(zhǎng)

離心后白環(huán)層彌散	細(xì)胞密度過大	調(diào)整細(xì)胞密度

離心后白環(huán)層太淺或看不見	細(xì)胞密度過小
離心后白環(huán)層太淺或看不見	細(xì)胞密度過小

本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度
、大氣壓等密切相關(guān)
。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整
。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，恒定離心時(shí)間
，對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整
。

本分離液依照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，全部使用藥用級(jí)原料
，性能指標(biāo)與國(guó)產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同
，可能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速
。

注：在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)

，直至達(dá)到最佳分離效果

，

離心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g

。離心時(shí)間以 20-30min 為準(zhǔn)

。

技術(shù)支持：庫價(jià)化學(xué)(KuuJia)

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別名	豚鼠臟器組織中性粒細(xì)胞分離液試劑盒
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