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兔臟器組織中性粒細胞分離液KIT說明書
 
本品用于分離兔臟器組織中性粒細胞
技術(shù)文檔編號：TBD0035SOP
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
 

	名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格
A	分離液 1		200ml
B	試劑 F（贈品）	F2013TBD	200ml
C	樣本稀釋液（贈品）	2010C1119	200ml
D	清洗液（贈品）	2010X1118	200ml
E	紅細胞裂解液（贈品）	NH4CL2009	100ml
F	說明書		1 份

 
【實驗前準備】
 
適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。
 

• 首先制備組織單細胞懸液，制備方法詳見“組織單細胞懸液制備技術(shù)”
  。

 

• 取一支 15ml 離心管，依次加入分離液 1
  。

 

• 用吸管小心吸取細胞懸液樣本加于分離液之液面上
  ，400-650g ，離心 20-30min（注：如改變樣本及分離液用量
  ，需相應調(diào)整離心力及離心時間
  ，具體離心條件需客戶自行摸索
  ，以達到最佳分離效果）
  。

 

• 離心后，離心管中將出現(xiàn)兩層環(huán)狀乳白色細胞層
  ，上層細胞為單個核細胞層，下層細胞為中性粒細胞層
  。

 

• 用吸管小心吸取分離液中的中性粒細胞層，如有紅細胞混雜則加入適量紅細胞裂解液（產(chǎn)品編號：NH4CL2009）將紅細胞裂解（具體方法見“紅細胞裂解液使用說明”）即得目的細胞
  。

 

• 將獲得的細胞層移至另一 15ml 離心管中
  ，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：

 
2010X1118），混勻細胞。

• 250g
  ，離心 10min。

 

• 棄上清
  。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細胞
  。

 

• 250g，離心 10min
  。

 

• 重復 8、9
  、10
  ，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應液體重懸細胞。

 
分離圖例
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
【注意事項】
 

• 全過程樣本
  、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行

  。為獲得最佳的實驗結(jié)果

  ，需在取樣 2h 內(nèi)進行實驗

  。

 

• 本實驗最好不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應使用無靜電
  、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品
  ，因為靜電作用將導致細胞貼壁
  、堿處理的玻璃表面會變成毛面
  ，影響細胞分離效果。

 

• 分離液用量大于組織單細胞懸液樣本量時
  ，分離效果更佳
  。

 

• 如實驗后細胞得率或活性過低，請聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助.

 
【儲存條件及有效期】
 
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
【參考值（參考范圍）】
 
本實驗中性粒細胞提取率大于 80%。