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中文名稱：小鼠外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒
中文別名：小鼠外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒

鼠外周血中性粒細(xì)胞分離液KIT說明書

【產(chǎn)品規(guī)格】

200ml/Kit

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：

	名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格

A	分離液 1		200ml

B	樣本稀釋液	2010C1119	200ml

C	清洗液（贈品）	2010X1118	200ml

D	紅細(xì)胞裂解液（贈品）	NH4CL2009	100ml

E	紅細(xì)胞沉降液（6%羥乙基淀粉）	HES-TBD550-80	80ml

F	說明書		1 份

【實驗前準(zhǔn)備】

適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機

【檢驗方法】

全過程樣本

、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行

。

取一支 15ml 離心管
，先加入分離液 1：3ml
，后加入 80%濃度分離液 1 溶液（分離液 1：

樣本稀釋液=4：1 的混合液）：1.5ml，形成梯度界面

。

制備血液樣本：抗凝血液與紅細(xì)胞沉降液按 1：1 比例混勻后，小心加于分離液梯度界面之上
，800g 離心 20min
。

離心后
，血漿層下出現(xiàn)兩層白色環(huán)狀細(xì)胞層
，取下層白色環(huán)狀中性粒細(xì)胞層（會有少量紅細(xì)胞混雜）
，加 3-5 倍體積清洗液混勻，400g 離心 10min
。

離心后棄上清
，后可通過兩種方法去除紅細(xì)胞
。

方法一：細(xì)胞沉淀用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞（具體方法參見“紅細(xì)胞裂解液說明書”）

。

方法二：

細(xì)胞沉淀用 1ml 紅細(xì)胞沉降液重懸，加于 3ml 分離液 1 之液面上
，400g 離心 20min。

取白色環(huán)狀細(xì)胞層
，加 3-5 倍體積清洗液混勻
，250g 離心 10min
，重復(fù)洗滌 2-3 次
，獲

得目的細(xì)胞（如仍有少量紅細(xì)胞混雜

，使用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞）

。

分離圖例

【注意事項】

全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行
。為獲得最佳的實驗結(jié)果
，最好在取血 2h 內(nèi)進行實驗，血液存放時間越長，細(xì)胞分離效果越差
。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的
。

本實驗最好不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品
，應(yīng)使用無靜電
、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁
、堿處理的玻璃表面會變成毛面
，影響細(xì)胞分離效果
。

分離液用量大于血液樣本時
，分離效果更佳。

如實驗后細(xì)胞得率或活性過低
，請聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助
，具體聯(lián)系方式詳見下方生產(chǎn)企業(yè)信息。

請勿使用具有紅細(xì)胞保護成分的抗凝劑
，否則影響分離效果（離心后，紅細(xì)胞不能完全沉至離心管底部）
。

【儲存條件及有效期】

常溫保存

，有效期 2 年

。本品易感染細(xì)菌

，需無菌條件操作

。無菌條件下操作

，啟

封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶

，影響分離效果。

【參考值（參考范圍）】

	本實驗中性粒細(xì)胞提取率大于 80% 。
【相關(guān)實驗技術(shù)方案】
1.	所獲得中性粒細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。
2.	所獲得中性粒細(xì)胞的核酸提取技術(shù) 。

所獲得中性粒細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù)

D.PCR 技術(shù)

【可能存在的問題及解決方法】

1. 由于血液粘度

、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：

出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因	建議解決方案

離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層	轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短	適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長
離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長

離心后白環(huán)層彌散	細(xì)胞密度過大	調(diào)整細(xì)胞密度

離心后白環(huán)層太淺或看不見	細(xì)胞密度過小
離心后白環(huán)層太淺或看不見	細(xì)胞密度過小

本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心
，其密度與溫度
、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進行適當(dāng)調(diào)整
。建議對離心條件進行調(diào)整時，恒定離心時間
，對離心轉(zhuǎn)速進行調(diào)整
。

本分離液依照國際標(biāo)準(zhǔn)，全部使用藥用級原料
，性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同
，可

能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況

，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速

。

注：在對離心條件進行調(diào)整時，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)

，直至達到最佳分離效果

，

離心力最小不得小于 400g

，最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準(zhǔn)

。

技術(shù)支持：庫價化學(xué)(KuuJia)

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