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中文名稱：狗外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒
中文別名：狗外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒

“XXXX”動物外周血中性粒細(xì)胞分離液 KIT 說明書

本品用于分離狗外周血中性粒細(xì)胞

技術(shù)文檔編號：TBD0034SOP

【產(chǎn)品規(guī)格】

200ml/Kit

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶使用

，試劑內(nèi)容如下：

	名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格

A	分離液 1		200ml

B	分離液 2		100ml

C	清洗液（贈品）	2010X1118	200ml

D	紅細(xì)胞裂解液（贈品）	NH4CL2009	100ml

E	說明書		1 份

【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】

適用儀器：最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)

【檢驗(yàn)方法】

全過程樣本

、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。

根據(jù)樣本量大小

，分以下兩種情況：

情況 A：血液樣本量小于 5ml 時

，實(shí)驗(yàn)方法如下：

取一支 15ml 離心管，先加入 4ml 分離液 1
，后將 2ml 分離液 2 小心疊加于分離液 1 之上
，形成梯度界面。

用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上
，500-650g
，離心 20-30min（注：如改變血液樣本及分離液用量，需相應(yīng)調(diào)整離心力及離心時間
，具體離心條件需客戶自行摸索
，以達(dá)到最佳分離效果。）

離心后
，離心管中將出現(xiàn)兩層環(huán)狀乳白色細(xì)胞層
，上層細(xì)胞為單個核細(xì)胞層，下層細(xì)胞為中性粒細(xì)胞層
。

用吸管小心吸取分離液中的中性粒細(xì)胞層
，如有紅細(xì)胞混雜則加入適量紅細(xì)胞裂解液（產(chǎn)品編號：NH4CL2009）將紅細(xì)胞裂解（具體方法見“紅細(xì)胞裂解液使用說明”）即得目的細(xì)胞
。

將獲得的細(xì)胞層移至另一 15ml 離心管中，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：

2010X1118）

，混勻細(xì)胞

。

250g，離心 10min
。

棄上清
。

用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細(xì)胞。

250g
，離心 10min。

重復(fù) 7
、8
、9，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞
。

情況 B：血液樣本量大于等于 5ml 時
，實(shí)驗(yàn)方法如下：

取一支適當(dāng)?shù)碾x心管，依次小心加入分離液 1 及分離液 2（分離液 1 與分離液 2 比例 2：1）,試劑總量與稀釋后的樣本量相等
。

將血液樣本小心加于分離液之液面上
，550-750g（最大離心力可至 1000g），離心 20-30min
。（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件
，血液量越多，離心力越大
，離心

時間越長

，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果

。加入血液樣本后

，樣本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二）。

剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 至步驟 10
。

分離圖例

【注意事項(xiàng)】

全過程樣本
、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果
，最好在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)
，血液存放時間越長，細(xì)胞分離效果越差
。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的
。

本實(shí)驗(yàn)最好不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電
、低靜電離心

管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品

，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會

變成毛面，影響細(xì)胞分離效果

。

分離液用量大于血液樣本時
，分離效果更佳。

血液樣本不需稀釋
，直接進(jìn)行分離即可
。

如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過低，請聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助
，具體聯(lián)系方式詳見下方生產(chǎn)企業(yè)信息
。

【儲存條件及有效期】

常溫保存，有效期 2 年

。本品易感染細(xì)菌

，需無菌條件操作。無菌條件下操作

，啟

封后置常溫保存

。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶

，影響分離效果

。

【參考值（參考范圍）】

本實(shí)驗(yàn)中性粒細(xì)胞提取率大于 80%。

下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例

，用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考

。

	紅細(xì)胞		白細(xì)胞		血小板

		（4.0-10.0）×10⁹
含量（個/L）	（4.0-5.5）×10¹²	中性粒細(xì)胞	淋巴細(xì)胞	單核細(xì)胞	（1.0-3.0）×10¹¹
		50%-70%	20%-40%	3%-8%

【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】

所獲得中性粒細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。

所獲得中性粒細(xì)胞的核酸提取技術(shù)
。

所獲得中性粒細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù)

D.PCR 技術(shù)

【可能存在的問題及解決方法】

1. 由于血液粘度

、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：

出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因	建議解決方案

離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層	轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短	適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長
離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長

離心后白環(huán)層彌散	細(xì)胞密度過大	調(diào)整細(xì)胞密度


離心后白環(huán)層太淺或看不見	細(xì)胞密度過小

本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度
、大氣壓等密切相關(guān)
。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對離心條件進(jìn)行調(diào)整時
，恒定離心時間
，對離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。

本分離液依照國際標(biāo)準(zhǔn)
，全部使用藥用級原料
，性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可

能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況

，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速

。

注：在對離心條件進(jìn)行調(diào)整時，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)

，直至達(dá)到最佳分離效果

，

離心力最小不得小于 400g

，最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準(zhǔn)

。

技術(shù)支持：庫價化學(xué)(KuuJia)

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別名	狗外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒
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