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鼠外周血中性粒細胞分離液 KIT說明書
本品用于分離大鼠外周血中性粒細胞
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
 

	名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格
A	分離液 1		200ml
B	樣本稀釋液	2010C1119	200ml
C	清洗液（贈品）	2010X1118	200ml
D	紅細胞裂解液（贈品）	NH4CL2009	100ml
E	紅細胞沉降液（6%羥乙基淀粉）	HES-TBD550-80	80ml
F	說明書		1 份

 
【實驗前準備】
 
適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。
 

• 取一支 15ml 離心管
  ，先加入分離液 1：3ml
  ，后加入 80%濃度分離液 1 溶液（分離液 1：

 
樣本稀釋液=4：1 的混合液）：1.5ml，形成梯度界面。
 

• 制備血液樣本：抗凝血液與紅細胞沉降液按 1：1 比例混勻后，小心加于分離液梯度界面之上
  ，800g 離心 20min
  。

 

• 離心后
  ，血漿層下出現(xiàn)兩層白色環(huán)狀細胞層
  ，取下層白色環(huán)狀中性粒細胞層（會有少量紅細胞混雜），加 3-5 倍體積清洗液混勻
  ，400g 離心 10min
  。

 

• 離心后棄上清，后可通過兩種方法去除紅細胞
  。

 
方法一：細胞沉淀用紅細胞裂解液去除紅細胞（具體方法參見“紅細胞裂解液說明書”）。
 
方法二：
 

• 細胞沉淀用 1ml 紅細胞沉降液重懸
  ，加于 3ml 分離液 1 之液面上
  ，400g 離心 20min。

 

• 取白色環(huán)狀細胞層
  ，加 3-5 倍體積清洗液混勻
  ，250g 離心 10min
  ，重復洗滌 2-3 次

  ，獲

 
得目的細胞（如仍有少量紅細胞混雜，使用紅細胞裂解液去除紅細胞）。
 
分離圖例
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
【注意事項】
 

• 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行
  。為獲得最佳的實驗結(jié)果，最好在取血 2h 內(nèi)進行實驗
  ，血液存放時間越長
  ，細胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的
  。

 

• 本實驗最好不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品
  ，應(yīng)使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品
  ，因為靜電作用將導致細胞貼壁
  、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細胞分離效果
  。

 

• 分離液用量大于血液樣本時
  ，分離效果更佳。

 

• 如實驗后細胞得率或活性過低
  ，請聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助，具體聯(lián)系方式詳見下方生產(chǎn)企業(yè)信息
  。

 

• 請勿使用具有紅細胞保護成分的抗凝劑
  ，否則影響分離效果（離心后，紅細胞不能完全沉至離心管底部）
  。

 
【儲存條件及有效期】
 
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
 
封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
 
【參考值（參考范圍）】
 

	本實驗中性粒細胞提取率大于 80%。
【相關(guān)實驗技術(shù)方案】
1.	所獲得中性粒細胞的培養(yǎng)技術(shù) 。
2.	所獲得中性粒細胞的核酸提取技術(shù) 。