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中文名稱：牛脾臟中性粒細胞分離液試劑盒
中文別名：牛脾臟中性粒細胞分離液試劑盒

“XXXX”動物脾臟組織中性粒細胞分離液KIT說明書

本品用于分離牛脾臟中性粒細胞
技術(shù)文檔編號：TBD0036SOP

【產(chǎn)品規(guī)格】

200ml/Kit

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶使用

，試劑內(nèi)容如下：

	名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格

A	分離液 1		200ml

B	試劑 F（贈品）	F2013TBD	200ml

C	樣本稀釋液（贈品）	2010C1119	200ml

D	清洗液（贈品）	2010X1118	200ml

E	紅細胞裂解液（贈品）	NH4CL2009	100ml

F	說明書		1 份

【實驗前準備】

適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機

【檢驗方法】

全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行

。

首先制備脾臟組織單細胞懸液
，制備方法詳見“組織單細胞懸液制備技術(shù)”。

取一支 15ml 離心管
，依次小心加入分離液 1
。

用吸管小心吸取細胞懸液樣本加于分離液之液面上，400-650g
，離心 20-30min（注：如改變樣本及分離液用量
，需相應(yīng)調(diào)整離心力及離心時間，具體離心條件需客戶自行摸索
，以達到最佳分離效果）
。

離心后，離心管中將出現(xiàn)兩層環(huán)狀乳白色細胞層
，上層細胞為單個核細胞層
，下層細胞為中性粒細胞層。

用吸管小心吸取分離液中的中性粒細胞層
，如有紅細胞混雜則加入適量紅細胞裂解液（產(chǎn)品編號：NH4CL2009）將紅細胞裂解（具體方法見“紅細胞裂解液使用說明”）即得目的細胞
。

將獲得的細胞層移至另一 15ml 離心管中，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：

2010X1118）

，混勻細胞

。

250g，離心 10min
。

棄上清。

用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細胞
。

250g
，離心 10min。

重復(fù) 8
、9、10
，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細胞
。

分離圖例

【注意事項】

全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行
。為獲得最佳的實驗結(jié)果
，需在取樣 2h 內(nèi)進行實驗
。

本實驗最好不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品
，應(yīng)使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品
，因為靜電作用將導(dǎo)致細胞貼壁
、堿處理的玻璃表面會變成毛面
，影響細胞分離效果
。

分離液用量大于脾臟組織單細胞懸液樣本量時，分離效果更佳
。

如實驗后細胞得率或活性過低
，請聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助.

【儲存條件及有效期】

常溫保存，有效期 2 年

。本品易感染細菌，需無菌條件操作

。無菌條件下操作

，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶

，影響分離效果。
【參考值（參考范圍）】

本實驗中性粒細胞提取率大于 80%

。


下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例，用戶可適當進行參考。

	紅細胞		白細胞		血小板

		（4.0-10.0）×10⁹
含量（個/L）	（4.0-5.5）×10¹²	中性粒細胞	淋巴細胞	單核細胞	（1.0-3.0）×10¹¹
		50%-70%	20%-40%	3%-8%

【相關(guān)實驗技術(shù)方案】

脾臟組織單細胞懸液制備技術(shù)。

所獲得中性粒細胞的培養(yǎng)技術(shù)
。

所獲得中性粒細胞的核酸提取技術(shù)
。

所獲得中性粒細胞的鑒定方法A.流式細胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù)

D.PCR 技術(shù)

【可能存在的問題及解決方法】

1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：

出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因	建議解決方案

離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層	轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短	適當增減轉(zhuǎn)速

離心后目的細胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長
離心后目的細胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長

離心后白環(huán)層彌散	細胞密度過大	調(diào)整細胞密度

離心后白環(huán)層太淺或看不見	細胞密度過小
離心后白環(huán)層太淺或看不見	細胞密度過小

本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心
，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)
。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當?shù)厍闆r對離心條件進行適當調(diào)整
。建議對離心條件進行調(diào)整時，恒定離心時間
，對離心轉(zhuǎn)速進行調(diào)整。

本分離液依照國際標準
，全部使用藥用級原料
，性能指標與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可能出現(xiàn)紅細胞沉降不完全的情況
，可以適當加大離心轉(zhuǎn)速
。

注：在對離心條件進行調(diào)整時

，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)

，直至達到最佳分離效果，離心力最小不得小于 400g

，最大不得大于 1200g

。離心時間以 20-30min 為準。

技術(shù)支持：庫價化學(xué)(KuuJia)

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