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。
 

• 首先制備脾臟組織單細(xì)胞懸液
  ，制備方法詳見“組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)”

  。

 

• 取一支 15ml 離心管
  ，依次小心加入分離液 1

  。

 

• 用吸管小心吸取細(xì)胞懸液樣本加于分離液之液面上
  ，400-650g 

  ，離心 20-30min（注：如改變樣本及分離液用量，需相應(yīng)調(diào)整離心力及離心時間

  ，具體離心條件需客戶自行摸索

  ，以達到最佳分離效果）

  。

 

• 離心后
  ，離心管中將出現(xiàn)兩層環(huán)狀乳白色細(xì)胞層

  ，上層細(xì)胞為單個核細(xì)胞層

  ，下層細(xì)胞為中性粒細(xì)胞層

  。

 

• 用吸管小心吸取分離液中的中性粒細(xì)胞層
  ，如有紅細(xì)胞混雜則加入適量紅細(xì)胞裂解液（產(chǎn)品編號：NH4CL2009）將紅細(xì)胞裂解（具體方法見“紅細(xì)胞裂解液使用說明”）即得目的細(xì)胞

  。

 

• 將獲得的細(xì)胞層移至另一 15ml 離心管中
  ，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：

 
2010X1118）  

• 250g
  ，離心 10min。

 

• 棄上清
  。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細(xì)胞
  。

 

• 250g
  ，離心 10min。

 

• 重復(fù) 8
  、9、10

  ，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞

  。

 
分離圖例
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
【注意事項】
 

• 全過程樣本
  、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行

  。為獲得最佳的實驗結(jié)果，需在取樣 2h 內(nèi)進行實驗

  。

 

• 本實驗最好不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電
  、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品

  ，因為靜電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁

  、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細(xì)胞分離效果

  。

 

• 分離液用量大于脾臟組織單細(xì)胞懸液樣本量時，分離效果更佳
  。

 

• 如實驗后細(xì)胞得率或活性過低
  ，請聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助.

 
【儲存條件及有效期】
 
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
【參考值（參考范圍）】
 
本實驗中性粒細(xì)胞提取率大于 80%。
 

	下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例 ，用戶可適當(dāng)進行參考 。
		紅細(xì)胞		白細(xì)胞			血小板
			（4.0-10.0）×109
	含量（個/L）	（4.0-5.5）×1012	中性粒細(xì)胞	淋巴細(xì)胞		單核細(xì)胞	（1.0-3.0）×1011
			50%-70%	20%-40%		3%-8%
	【相關(guān)實驗技術(shù)方案】

 

• 脾臟組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)
  。

 

• 所獲得中性粒細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)
  。

 

• 所獲得中性粒細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。

 

• 所獲得中性粒細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù)

 
D.PCR 技術(shù)
 
【可能存在的問題及解決方法】
 
1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：
 

出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因	建議解決方案
離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層	轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短	適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速
離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長
離心后白環(huán)層彌散	細(xì)胞密度過大	調(diào)整細(xì)胞密度
離心后白環(huán)層太淺或看不見	細(xì)胞密度過小

 

• 本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心
  ，其密度與溫度
  、大氣壓等密切相關(guān)
  。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進行適當(dāng)調(diào)整。建議對離心條件進行調(diào)整時
  ，恒定離心時間

  ，對離心轉(zhuǎn)速進行調(diào)整

  。

 

• 本分離液依照國際標(biāo)準(zhǔn)
  ，全部使用藥用級原料，性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同
  ，可能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況
  ，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。

 
注：在對離心條件進行調(diào)整時，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達到最佳分離效果，離心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準(zhǔn)。