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中文名稱：豬骨髓中性粒細(xì)胞分離液試劑盒
中文別名：豬骨髓中性粒細(xì)胞分離液試劑盒

“XXXX”動(dòng)物骨髓中性粒細(xì)胞分離液KIT說明書

技術(shù)文檔編號(hào)：TBD0037SOP

【產(chǎn)品規(guī)格】

200ml/Kit

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶使用

，試劑內(nèi)容如下：

	名稱	產(chǎn)品編號(hào)	規(guī)格

A	分離液 1		200ml

B	試劑 F（贈(zèng)品）	F2013TBD	200ml

C	樣本稀釋液（贈(zèng)品）	2010C1119	200ml

D	清洗液（贈(zèng)品）	2010X1118	200ml

E	紅細(xì)胞裂解液（贈(zèng)品）	NH4CL2009	100ml

F	說明書		1 份

【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】

適用儀器：最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)

【檢驗(yàn)方法】

全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行

。

首先制備骨髓單細(xì)胞懸液，制備方法詳見“骨髓沖洗單細(xì)胞懸液制備技術(shù)”
。

取一支 15ml 離心管
，依次小心加入分離液 1
。

用吸管小心吸取細(xì)胞懸液樣本加于分離液之液面上
，400-650g
，離心 20-30min（注：如改變樣本及分離液用量，需相應(yīng)調(diào)整離心力及離心時(shí)間
，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果）
。

離心后
，離心管中將出現(xiàn)兩層環(huán)狀乳白色細(xì)胞層，上層細(xì)胞為單個(gè)核細(xì)胞層
，下層細(xì)胞為中性粒細(xì)胞層。

用吸管小心吸取分離液中的中性粒細(xì)胞層
，如有紅細(xì)胞混雜則加入適量紅細(xì)胞裂解液（產(chǎn)品編號(hào)：NH4CL2009）將紅細(xì)胞裂解（具體方法見“紅細(xì)胞裂解液使用說明”）即得目的細(xì)胞
。

將獲得的細(xì)胞層移至另一 15ml 離心管中，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：

2010X1118）

，混勻細(xì)胞

。

250g，離心 10min
。

棄上清
。

用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118）重懸所得細(xì)胞
。

250g
，離心 10min。

重復(fù) 8
、9、10
，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞
。

分離圖例：

【注意事項(xiàng)】

全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行
。為獲得最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，需在取樣 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)
。

本實(shí)驗(yàn)最好不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品
，應(yīng)使用無靜電
、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品
，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁
、堿處理的玻璃表面會(huì)變成毛面，影響細(xì)胞分離效果
。

分離液用量大于骨髓單細(xì)胞懸液樣本量時(shí)，分離效果更佳
。

如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過低
，請聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助.

【儲(chǔ)存條件及有效期】

常溫保存

，有效期 2 年

。本品易感染細(xì)菌，需無菌條件操作

。無菌條件下操作

，啟封后置常溫保存

。如 4℃保存

，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果

。
【參考值（參考范圍）】

本實(shí)驗(yàn)中性粒細(xì)胞提取率大于 80%。


下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例，用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。

	紅細(xì)胞		白細(xì)胞		血小板

		（4.0-10.0）×10⁹
含量（個(gè)/L）	（4.0-5.5）×10¹²	中性粒細(xì)胞	淋巴細(xì)胞	單核細(xì)胞	（1.0-3.0）×10¹¹
		50%-70%	20%-40%	3%-8%

【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】

骨髓沖洗單細(xì)胞懸液制備技術(shù)
。

所獲得中性粒細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。

所獲得中性粒細(xì)胞的核酸提取技術(shù)
。

所獲得中性粒細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù)

D.PCR 技術(shù)

【可能存在的問題及解決方法】

1. 由于血液粘度

、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：

出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因	建議解決方案

離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層	轉(zhuǎn)速過小或離心時(shí)間過短	適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時(shí)間過長
離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時(shí)間過長

離心后白環(huán)層彌散	細(xì)胞密度過大	調(diào)整細(xì)胞密度

離心后白環(huán)層太淺或看不見	細(xì)胞密度過小
離心后白環(huán)層太淺或看不見	細(xì)胞密度過小

本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心
，其密度與溫度
、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整
。建議對離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)
，恒定離心時(shí)間
，對離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。

本分離液依照國際標(biāo)準(zhǔn)
，全部使用藥用級原料
，性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況
，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速
。

注：在對離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)

，直至達(dá)到最佳分離效果

，離心力最小不得小于 400g

，最大不得大于 1200g

。離心時(shí)間以 20-30min 為準(zhǔn)。

技術(shù)支持：庫價(jià)化學(xué)(KuuJia)

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