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中文名稱：貓骨髓中性粒細胞分離液試劑盒
中文別名：貓骨髓中性粒細胞分離液試劑盒

“XXXX”動物骨髓中性粒細胞分離液KIT說明書

技術文檔編號：TBD0037SOP

【產(chǎn)品規(guī)格】

200ml/Kit

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶使用

，試劑內(nèi)容如下：

	名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格

A	分離液 1		200ml

B	試劑 F（贈品）	F2013TBD	200ml

C	樣本稀釋液（贈品）	2010C1119	200ml

D	清洗液（贈品）	2010X1118	200ml

E	紅細胞裂解液（贈品）	NH4CL2009	100ml

F	說明書		1 份

【實驗前準備】

適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機

【檢驗方法】

全過程樣本

、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。

首先制備骨髓單細胞懸液
，制備方法詳見“骨髓沖洗單細胞懸液制備技術”
。

取一支 15ml 離心管，依次小心加入分離液 1
。

用吸管小心吸取細胞懸液樣本加于分離液之液面上
，400-650g ，離心 20-30min（注：如改變樣本及分離液用量
，需相應調(diào)整離心力及離心時間
，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到最佳分離效果）
。

離心后
，離心管中將出現(xiàn)兩層環(huán)狀乳白色細胞層，上層細胞為單個核細胞層
，下層細胞為中性粒細胞層
。

用吸管小心吸取分離液中的中性粒細胞層，如有紅細胞混雜則加入適量紅細胞裂解液（產(chǎn)品編號：NH4CL2009）將紅細胞裂解（具體方法見“紅細胞裂解液使用說明”）即得目的細胞。

將獲得的細胞層移至另一 15ml 離心管中
，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：

2010X1118）

，混勻細胞。

250g
，離心 10min
。

棄上清。

用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細胞
。

250g
，離心 10min。

重復 8
、9
、10，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應液體重懸細胞
。

分離圖例：

【注意事項】

全過程樣本
、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結果
，需在取樣 2h 內(nèi)進行實驗
。

本實驗最好不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應使用無靜電
、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品
，因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面
，影響細胞分離效果
。

分離液用量大于骨髓單細胞懸液樣本量時，分離效果更佳
。

如實驗后細胞得率或活性過低
，請聯(lián)系技術支持以尋求幫助.

【儲存條件及有效期】

常溫保存，有效期 2 年

。本品易感染細菌

，需無菌條件操作。無菌條件下操作

，啟封后置常溫保存

。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結晶

，影響分離效果

。
【參考值（參考范圍）】

本實驗中性粒細胞提取率大于 80%。


下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例，用戶可適當進行參考。

	紅細胞		白細胞		血小板

		（4.0-10.0）×10⁹
含量（個/L）	（4.0-5.5）×10¹²	中性粒細胞	淋巴細胞	單核細胞	（1.0-3.0）×10¹¹
		50%-70%	20%-40%	3%-8%

【相關實驗技術方案】

骨髓沖洗單細胞懸液制備技術
。

所獲得中性粒細胞的培養(yǎng)技術。

所獲得中性粒細胞的核酸提取技術
。

所獲得中性粒細胞的鑒定方法A.流式細胞技術B.免疫組化技術C.原位雜交技術

D.PCR 技術

【可能存在的問題及解決方法】

1. 由于血液粘度

、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：

出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因	建議解決方案

離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層	轉速過小或離心時間過短	適當增減轉速

離心后目的細胞存在于分離液中	轉速過大或離心時間過長
離心后目的細胞存在于分離液中	轉速過大或離心時間過長

離心后白環(huán)層彌散	細胞密度過大	調(diào)整細胞密度

離心后白環(huán)層太淺或看不見	細胞密度過小
離心后白環(huán)層太淺或看不見	細胞密度過小

本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度
、大氣壓等密切相關
。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當?shù)厍闆r對離心條件進行適當調(diào)整。建議對離心條件進行調(diào)整時
，恒定離心時間，對離心轉速進行調(diào)整
。

本分離液依照國際標準
，全部使用藥用級原料，性能指標與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同
，可能出現(xiàn)紅細胞沉降不完全的情況
，可以適當加大離心轉速。

注：在對離心條件進行調(diào)整時

，離心轉速的加減以 50-100g 為基數(shù)

，直至達到最佳分離效果，離心力最小不得小于 400g

，最大不得大于 1200g

。離心時間以 20-30min 為準。

技術支持：庫價化學(KuuJia)

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