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“XXXX”動物骨髓中性粒細胞分離液KIT說明書
 
技術文檔編號：TBD0037SOP
 
【產品規(guī)格】
 
200ml/Kit
 
【產品組成】
 
為方便廣大用戶使用，試劑內容如下：
 

	名稱	產品編號	規(guī)格
A	分離液 1		200ml
B	試劑 F（贈品）	F2013TBD	200ml
C	樣本稀釋液（贈品）	2010C1119	200ml
D	清洗液（贈品）	2010X1118	200ml
E	紅細胞裂解液（贈品）	NH4CL2009	100ml
F	說明書		1 份

 
【實驗前準備】
 
適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。
 

• 首先制備骨髓單細胞懸液
  ，制備方法詳見“骨髓沖洗單細胞懸液制備技術”。

 

• 取一支 15ml 離心管
  ，依次小心加入分離液 1

  。

 

• 用吸管小心吸取細胞懸液樣本加于分離液之液面上，400-650g 
  ，離心 20-30min（注：如改變樣本及分離液用量

  ，需相應調整離心力及離心時間，具體離心條件需客戶自行摸索

  ，以達到最佳分離效果）

  。

 

• 離心后，離心管中將出現兩層環(huán)狀乳白色細胞層
  ，上層細胞為單個核細胞層

  ，下層細胞為中性粒細胞層。

 

• 用吸管小心吸取分離液中的中性粒細胞層
  ，如有紅細胞混雜則加入適量紅細胞裂解液（產品編號：NH4CL2009）將紅細胞裂解（具體方法見“紅細胞裂解液使用說明”）即得目的細胞

  。

 

• 將獲得的細胞層移至另一 15ml 離心管中，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產品編號：

 
2010X1118），混勻細胞。
 

• 250g，離心 10min
  。

 

• 棄上清
  。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產品編號：2010X1118）重懸所得細胞。

 

• 250g
  ，離心 10min
  。

 

• 重復 8、9
  、10
  ，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應液體重懸細胞。

 
分離圖例：
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
【注意事項】
 

• 全過程樣本
  、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行
  。為獲得最佳的實驗結果，需在取樣 2h 內進行實驗
  。

 

• 本實驗最好不使用高聚合材質（如聚苯乙烯）的塑料制品
  ，應使用無靜電、低靜電離心管及未經堿處理過后的玻璃制品
  ，因為靜電作用將導致細胞貼壁
  、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細胞分離效果

  。

 

• 分離液用量大于骨髓單細胞懸液樣本量時
  ，分離效果更佳。

 

• 如實驗后細胞得率或活性過低
  ，請聯系技術支持以尋求幫助.

 
【儲存條件及有效期】
 
常溫保存