服務(wù)熱線：400-665-0203
研謹手機版
研謹手機版
EF03B-J2b 2016-01版
喹諾酮類
快速檢測試劑盒說明書
一 試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原 二、試劑盒特性 u 試劑盒靈敏度： 0.1ppb u 孵育溫度： 25℃ u 孵育時間： 30min～15min u 樣本檢測下限 組織 、血清 ········································ 1ppb u 交叉反應(yīng)率 恩諾沙星（ENR） ·························· 100% 環(huán)丙沙星（CIF） ···························· 100% 氧氟沙星（OFL） ·························· 60% 奧索利酸（OXO） ··························· 116.86% 達氟沙星（DAN） ··························· 102.63% 諾氟沙星（NOR） ··························· 148.65% 洛美沙星（LOM） ·························· 86.24% 培氟沙星（PEF） ·························· 156.60% 依諾沙星（ENO） ··························· 98.97% 氟喹酸（FLU） ··························· 96.73% 麻保沙星（MAR） ·························· 110.63% 氨氟沙星（AMI） ··························· 98.86% 那氟沙星（NAD） ··························· 56.81% u 樣本回收率 組織、血清 ································· 85±20% 三、試劑盒組成 1 微量測試孔 每條8孔，一板12條 2 標準液×6瓶 （1ml/瓶） 0ppb 0.1ppb 0.3ppb 0.9ppb 2.7ppb 8.1ppb 3 酶標記物 7ml 紅色帽 4 抗體工作液 7ml 藍色帽 5 底物A液 7ml 白色帽 6 底物B液 7ml 黑色帽 7 終止液 7ml 黃色帽 8 20X濃縮洗滌液 40ml 白色帽 9 20X濃縮復(fù)溶液 50ml 透明帽 四、所用儀器、試劑 具備的儀器：微孔酶標儀、打印機、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g） 微量移液器：單道 20～200ul、單道100～1000ul、多道 250 ul 五、樣本前處理步驟 u 樣本處理前須知 處理任何樣本時，都必須注意： （a） 實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。 （b） 實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果。 u 樣本前處理需配制： 配液1 樣本復(fù)溶液 將20X濃縮復(fù)溶液用去離子水按1：19（1份濃縮復(fù)溶液+19份去離子水）進行稀釋。 u 樣本處理： a）組織樣本處理方法 1、稱1.0±0.05g 均質(zhì)過的組織樣本于50ml離心管中； 2、加入10ml樣本復(fù)溶液 3 樣本稀釋倍數(shù)：10 b）血清樣本處理方法 1、 取50μl澄清的血清 2 樣本稀釋倍數(shù): 10倍 六 u 測定前應(yīng)須知： 1 2 3、 在ELISA分析中的再現(xiàn)性 4 u 操作步驟： 1 2、 按需要取出微孔條及板架，將不用的微孔板重新密封，保存于2-8℃，不要冷凍 3 4 5 6、 用洗滌液按每孔250μl洗板4-5次 7 8 七 結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法 1 用樣本的平均吸光度值與標準品比較即可得出其濃度范圍(ng/ml) 2 （1）百分吸光率的計算 百分吸光率（%）＝ B ×100% B0 B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值 （2）標準曲線的繪制與計算 以標準品百分吸光率為縱坐標 若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算 八 1、 室溫低于25℃或試劑及標本未回到室溫（20-25℃）會導(dǎo)致所有標準的OD值偏低 2 3 4、 反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。 5、 不要使用過了有效日期的試劑盒；稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值變化；不要交換使用不同批號的盒中試劑。 6、 不用的微孔板放進自封袋重新密封 7 8、 該試劑盒反應(yīng)溫度為25℃ 九、儲藏條件和保質(zhì)期 1 2、原理，樣本中的殘留物喹諾酮類藥物和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗喹諾酮類藥物抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留喹諾酮類藥物的含量成負相關(guān)，與標準曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物喹諾酮類藥物的含量。
，振蕩3min，4000r/min以上，15℃離心10min；、取上清50μl液體用于分析。，加入450μl 樣本復(fù)溶液混合，混勻30S（如果血清樣本渾濁，將樣本于10℃，4000r/min以上離心10min，分離出血清或過濾血清，直至得到澄清的樣本）；、 取50μl液體用于分析。、 酶標免疫分析程序:、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫（20-25℃）。、 使用之后立即將所有試劑放回2-8℃。，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。、 所有恒溫孵育過程，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。、 將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出并將所需試劑從試劑盒取出，置室溫（20-25℃）平衡30min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。。、 配液：將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。、 編號：將樣本和標準品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標準品均需做2孔平行，并記錄標準孔的樣本孔所在的位置。、 加標準品/樣本50μl /孔，然后加酶標記物50μl/孔，再加入抗體工作液50μl/孔。輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板，25℃環(huán)境反應(yīng)30min。，每次浸泡15-30秒，拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。、 顯色：每孔加入底物A液50μl再加入底物B液50μl，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境避光顯色15min。、 測定：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定吸光度值（OD值）。、結(jié)果判定，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含喹諾酮類藥物量成負相關(guān)。、粗略判定： 。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.238， 樣本2的吸光度值為0.946 ，標準液吸光度值分別是：0ppb為1.845 ； 0.1ppb為1.542；0.3ppb為1.130 ； 0.9ppb為0.635 ；2.7ppb為0.326； 8.1ppb為0.156 。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb - 8.1ppb ；樣本2的濃度范圍是0.3ppb - 0.9ppb 。乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中喹諾酮類藥物的實際濃度。 、定量分析 ，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個標準（0標準）的吸光度值，再乘以100% ，即
，以喹諾酮類標準品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中喹諾酮類藥物實際濃度。，更便于大量樣本的準確、快速分析。、 注意事項。、 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會伴隨著標準曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。、 混合要均勻，否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。 ；標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感 ，因此要避免直接暴露在光線下 。 、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì) ，應(yīng)當(dāng)棄之。標準品1的吸光度值小于0.5時 ，表示試劑可能變質(zhì) 。 ，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化 。 、 儲藏條件：試劑盒于2-8℃保存 ，不要冷凍。 、 保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年 ，生產(chǎn)日期見包裝盒。