人甲狀腺癌細胞(B-CPAP)
貨號:HECL-013
細胞介紹
人甲狀腺乳頭狀癌細胞(papillary thyroid carcinoma, PTC)。
細胞特性
1) 來源:甲狀腺瘤
2) 形態(tài):圓形細胞貼壁生長
3) 含量:>1x106 個/mL
4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
細胞接受后的處理:
1) 收到細胞后,請檢查
是否漏液,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們
。
2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),去掉封口膜并將
T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加
6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
4) 如果細胞長滿(90%以上)請及時進行細胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
5) 接到細胞次日,請檢查細胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染
,請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系
。
細胞用途:僅供科研使用。
本公司的細胞培養(yǎng)操作規(guī)程,供參考
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640: Thermo Fisher,貨號11875-093),
89%,添加NEAA(NEAA,
Thermo Fisher, 貨號11140-050) ,
1%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳
,
5%。 溫度:37℃,
培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM
條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入
1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有
5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,
即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣
、鎂離子
的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于
37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察
細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺
,輕敲
幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化。
3. 輕輕吹打后吸出,移入15ml
離心管中,
在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入
1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 移入到事先準備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時 ,
可進行細胞凍存 。貼壁
細胞凍存時,先要消化處理并進行細胞計數(shù) 。
消化方法按照細胞傳代方法的1-3步驟進行 ,最后的重懸液使用血清。
懸浮細胞直接計數(shù)后離心 ,用血清重懸浮
,
加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻 ,按每
1ml的數(shù)量分配到凍存管中 。
本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存 。
注意事項:
1. 收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈 、
凍存管瓶蓋脫落 、
破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系 。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性 ,
必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護
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