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中文名稱：流式細(xì)胞術(shù)檢測技術(shù)服務(wù)
中文別名：流式細(xì)胞術(shù)檢測技術(shù)服務(wù)

流式細(xì)胞術(shù)檢測技術(shù)服務(wù)

1、檢測項目： (1)細(xì)胞周期細(xì)胞（2）細(xì)胞凋亡 (3)免疫細(xì)胞分型 (4)表面抗原鑒定 (5)細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測 (6)線粒體功能 (7)細(xì)胞分選 2、樣本及來源： 1) 單個細(xì)胞：1~2×106 個細(xì)胞左右

；來源于人、小鼠

、大鼠或其它。 2) 外周血：EDTA或肝素抗凝全血

，5ml左右

；來源于人、小鼠

、大鼠或其它

。說明： 1、實驗所用的流式細(xì)胞儀為COULTER EPICS XL

。 2

、送檢樣本量： 1)、單個細(xì)胞：1~2×106 個細(xì)胞左右

；來源于人

、小鼠、大鼠或其它

。 2)

、外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右

；來源于人

、小鼠、大鼠或其它

。 3

、用戶需要進行流式細(xì)胞儀檢測時須提前預(yù)約

，同時說明實驗?zāi)康摹⒎椒ǖ?div id="jpandex" class="focus-wrap mb20 cf">。一次送檢標(biāo)本數(shù)不少于10個

。如果一次送檢標(biāo)本總數(shù)不足10個，每個測試費用為標(biāo)準(zhǔn)收費×2

。 4

、我公司在正式接受實驗委托一周內(nèi)交付實驗結(jié)果。所提供實驗結(jié)果忠實于樣本的實際情況

。 5

、用戶須一次性全額預(yù)付實驗費。 6

、部分常用熒光探針

，如PI等，我公司可免費提供

，

；特殊標(biāo)記物，如CD抗體等

，用戶須另行購買

，也可委托我公司代購；用戶所提供抗體應(yīng)可與樣本發(fā)生特異性識別反應(yīng)

。 7

、由用戶提供的樣品或試劑所致的實驗問題由用戶負(fù)責(zé)。 8

、請在表中說明檢測具體要求（可另附頁）

，由于填寫資料不詳所致任何問題由用戶負(fù)責(zé)。 9

、請在送樣的同時提供樣本來源及處理方法等信息

，樣品檢測后原則上本公司不負(fù)責(zé)保存。客戶提供：（1）標(biāo)本:組織

、細(xì)胞

、全血（抗凝）（2）抗體（熒光素標(biāo)記） PE最強，適用于弱表達抗原 FITC最便宜

，適用于強表達抗原

，適用范圍廣 biotin-avidin不適合弱抗原的檢測（3）其他試劑（如Fluo-3）（4）染色試劑盒附：流式細(xì)胞術(shù)檢測樣品推薦制備方法： A. 直接標(biāo)記抗體（FITC標(biāo)記抗體）： (1) 、收集1×106個細(xì)胞

，800rpm離心5min

，4℃以上冷PBS洗一次。 (2)

、用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘

，800rpm離心5min去上清

。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞，800rpm離心5min

。 (3)

、用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞，冰上孵育10min

，800rpm離心5min去上清

。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定

，待測即可

。 (4) 、用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞

。 B. 未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法： (1)

、收集2×106個細(xì)胞，用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次

，800rpm離心5min

。 (2)、用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min

；2ml PBS重懸細(xì)胞

，800rpm離心5min； (3)

、用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞

，冰上放置10min,800rpm離心5min。 (4)

、加入飽和劑量未標(biāo)記抗體，冰上放置40min,800rpm離心5min

，用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞

，800rpm離心5min，洗去未結(jié)合一抗

，重復(fù)一次

。 (5)、加入熒光標(biāo)記（FITC）標(biāo)記的二抗

，冰上避光放置40min后

，800rpm離心5min，去上清

，PBS洗滌兩次

。 (6)、加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞

；固定待測

。 (7)

、流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。 C.細(xì)胞周期

、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品（PI染色）的制備： (1)

、待測樣本制成單細(xì)胞懸液，然后2000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘

，棄上清

。 (2)、用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定

，4℃保存

，至少固定18小時。 (3)

、調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升

，取1毫升細(xì)胞懸液，用PBS洗三次

，細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中

，37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。 (4)

、PI染液終濃度為50微克/毫升

，RNase A終濃度為20微克/毫升。

技術(shù)支持：庫價化學(xué)(KuuJia)

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