雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）說明書

EA14A\00 2016-01版
雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名稱：Diagnostic Kit For Antibodies To
Chicken Infectious Bursal Disease Virus VP2（IBDV-VP2 Ab）,ELISA
【規(guī)格】
96T×2/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒主要目的是測定雞血清中雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體的相對水平?div id="jpandex" class="focus-wrap mb20 cf">？捎糜谠u估雞群雞傳染性法氏囊病病毒疫苗免疫狀況分析。
【檢驗原理】
本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）原理

，由包被有高純度的雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗原的微孔反應(yīng)板

、辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗雞IgG及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機理為包被抗原與樣本中的IBDV-VP2-Ab結(jié)合

，再與酶標(biāo)抗雞IgG抗體形成“包被抗原+IBDV-VP2-Ab+酶標(biāo)抗雞IgG抗體”復(fù)合物，加入顯色劑

，通過酶催化反應(yīng)顯色

。顯色深淺與IBDV-VP2-Ab的量成正比，當(dāng)樣本反應(yīng)顯色后

，經(jīng)酶標(biāo)儀檢測所得結(jié)果超過設(shè)定的臨界值時結(jié)果判為陽性

，即表明免疫產(chǎn)生了抗體或有自然感染存在。
【主要組成成份】

1	IBDV-VP2抗原包被板	96T×2
2	酶標(biāo)記物	22ml	黃色帽
3	樣本稀釋液	50ml	透明帽
4	IBDV-VP2-IgG陰性對照血清	1.5ml	綠色帽
5	IBDV-VP2-IgG陽性對照血清	1.5ml	紅色帽
6	顯色劑	12ml×2	橙色帽
7	終止液	12ml	藍色帽
8	20X濃縮洗滌液	50ml	白色帽
9	蓋板膜	2張
10	說明書	1份

【自備器材】
1．酶標(biāo)儀

，雙波長450/630nm濾光片
2．精確的微量移液器（單道1-100ul

、0.5-10ul、多道30-300ul）
3．水浴箱或恒溫箱
4．微量振蕩器
5．洗液吸移裝置
6．一次性槍頭（10ul

，200ul）
7．去離子水
【樣本要求】
1．本試劑檢測的樣本為雞血清

，樣本應(yīng)無菌采集，2℃～8℃貯存應(yīng)不超過一周

，長期應(yīng)在-20℃以下保存

。
2．避免使用嚴重溶血、有沉淀物

、含懸浮纖維蛋白及污染長菌及含疊氮鈉血清樣本

。
3．樣本中含有常規(guī)用量的EDTA、枸櫞酸鈉或肝素鈉等抗凝劑不影響本實驗

。
【實驗準備】
1．試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實驗前

，先取出置室溫30min
2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋，稀釋的樣本混合均勻能取得較好結(jié)果。
3．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液量取適量體積直接用去離子水稀釋20倍

，即可使用

。
【檢驗方法】
1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條

，檢測時

，設(shè)陰、陽性對照各2孔

，分別加入不用稀釋的陰

、陽性對照血清100μl于相應(yīng)孔中。其余為樣本孔

，每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本（可做單孔也可雙孔檢驗）

。2．溫育：加樣后，蓋上蓋板膜

，置37℃溫育30分鐘

。
3．洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿反應(yīng)板孔

，靜置10s

，直接甩出，洗滌3次

，最后一次洗滌后吸干板內(nèi)液體

。
4．加酶：每孔加酶標(biāo)記物100μl。
5．溫育：加好酶標(biāo)記物的反應(yīng)板蓋好蓋板膜

，置37℃溫育30分鐘

。
6．洗板：同步驟3。
7．顯色：每孔加顯色劑100μl

，振蕩混勻

，37℃避光反應(yīng)10分鐘。
8．終止：每孔加終止液50μl

，振蕩10秒

，充分混勻，終止后即讀數(shù)

。
9．讀數(shù)：以450/630nm雙波長檢測

，讀取各孔吸光度值（OD值）。
【結(jié)果判定】
在酶標(biāo)儀上測各孔的OD值

。檢測結(jié)果有效的條件是陽性對照孔的平均OD值≥0.6

，陰性對照孔的平均OD值必須＜0.15；樣品中抗體存在與否

，或樣本中抗體的相對水平的高低由S/P值決定

，S/P值計算時按以下方式處理:
S/P=(樣本OD_450/630值-NCx(—))/（PCx(—)-NCx(—))

，其中NCx(—)表示陰性對照孔平均OD_450/630值，PCx(—)表示陽性對照孔平均OD_450/630值

；
當(dāng)樣本的S/P≥0.2時判為陽性

；樣品S/P值＜0.2時判為陰性。
若進行大量樣本檢測時

，可使用試劑盒專業(yè)分析軟件進行分析數(shù)據(jù)結(jié)果

，該軟件可登陸本公司官方網(wǎng)站下載。
【檢驗結(jié)果的解釋】
1．嚴重溶血

、血清中纖維蛋白分離不充分

、含紅血球樣本可能導(dǎo)致假陽性；長菌的樣本可能導(dǎo)致假陰性

。
2．因個體差異或免疫時間長短等因素可能會出現(xiàn)個別雞只免疫疫苗后檢測結(jié)果為陰性

。
3．陽性結(jié)果用于感染雞的血清學(xué)診斷以及流行病學(xué)調(diào)查時需結(jié)合其他診斷方法和臨床資料進行分析。

【注意事項】
1．本試劑盒僅用于體外診斷

。
2．不要使用過期的試劑盒組分

，不要把不用批次的組分混合使用。
3．使用試劑盒之前

，一定要仔細閱讀說明書

。
4．本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對待，試驗廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘

，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄

。
5．微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開，未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封2℃-8℃保存

。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存

。
6．若20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶

，屬正常現(xiàn)象

，放置37℃至溶解后即可

。
7．應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑，并經(jīng)常校對其準確性

。
8．加洗滌液時應(yīng)做到滿而不溢

，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。
9．終止液有腐蝕性

，若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈

。
【儲存條件及有效期】
于2℃～8℃避光保存，防止冷凍

，有效期12個月

。
【生產(chǎn)日期及批號】
詳見包裝袋和外包裝盒

。

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